【摘 要】
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本试验旨在从原始森林土壤中分离并筛选出对植物病原菌具有良好拮抗效果的放线菌,寻找新农用抗生素产生菌来源,并对其产生的抑菌活性物质进行初步的研究和分析。(1)为了提高土壤中放线菌的分离效率,解决放线菌分离培养中真菌、细菌污染问题,本研究在前人的基础上研制出一种选择性分离放线菌的适宜方法:采样后立即将土样于28℃下风干10d,用6﹪酵母膏和0.05﹪十二烷基磺酸钠对其悬浮液进行混合预处理,再用稀释
【机 构】
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本试验旨在从原始森林土壤中分离并筛选出对植物病原菌具有良好拮抗效果的放线菌,寻找新农用抗生素产生菌来源,并对其产生的抑菌活性物质进行初步的研究和分析。
(1)为了提高土壤中放线菌的分离效率,解决放线菌分离培养中真菌、细菌污染问题,本研究在前人的基础上研制出一种选择性分离放线菌的适宜方法:采样后立即将土样于28℃下风干10d,用6﹪酵母膏和0.05﹪十二烷基磺酸钠对其悬浮液进行混合预处理,再用稀释平板法接种到添加了质量浓度为250mg/L重铬酸钟的玉米粉琼脂和黄豆粉琼脂两种培养基上,培养7d后进行放线菌分离。(2)本试验首次从采自陕西省周至自然保护区的20个土样中分离到了360株放线菌。(3)本试验对所分离到的360株放线菌采用琼脂平板和发酵液平板初筛、离体叶片法和盆栽复筛试验以及单孢分离的方法进行拮抗性筛选,得到一株对多种病原菌具有强烈拮抗作用、遗传稳定的新菌株S-5210。这种植物体内外相结合的筛选模型,大大减少了工作量,提高了筛选水平,并且可初步证明利用该模型筛选出的抗生素的性能稳定性。(4)根据S-5210菌株的形态、培养特征观察及生理生化特性试验,参照相关文献,初步判定其为链霉菌属淡紫灰类群。(5)在对新菌株S-5210抑菌活性物质的研究中,通过采用氯化钙加磷酸二氢钾共沉淀、乙酸乙酯萃取、离子交换树脂洗脱、高压液相色谱分离分析等方法可将S-5210活性物质最强组分从发酵液中较好地提取出来。(6)对S-5210粗提物的理化性质研究表明:该抗生素是一类碱性水溶性抗生素,可溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和苯等多种有机溶剂,不溶于已烷、乙醚、石油醚等,在弱酸和中性pH条件下对中高温较稳定,较耐贮存。(7)S-5210粗提物对细菌具有选择性抑制作用,但对病原真菌具有较广的抑菌谱,室内检测对12种病原真菌均有较强的拮抗作用,并且在温室条件下,对黄瓜霜霉病等专性寄生病原菌,不仅能阻止其菌丝的入侵,而且对已侵入的菌丝有很好的治疗作用。这均为广谱性抗菌农药的研制提供了理论依据。(8)S-5210活性产物的拮抗机理初步研究表明:S-5210粗提物能强烈抑制病原菌菌丝的生长和孢子的萌发,引起病原菌菌丝扭曲或膨大、分枝增多、分枝顶端细胞壁破裂、原生质外溢;分生孢子数减少,孢子萌发率降低,芽管畸形等异常现象;菌丝和分生孢子致病性减弱。
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