SIRT1通过调节LEF-1对软骨保护的机制研究

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目的 探究沉默信息调节因子1(Silent Information Regulator 1,SIRT-1)及相关因子在不同程度的骨关节炎(Osteoarthritis,OA)中的相互调节关系。方法 首先随机选取10位膝关节骨性关节炎全膝关节置换术后患者的新鲜胫骨平台标本。根据番红O固绿染色和苏木精-伊红染色结果将标本分成轻度组、中度组和重度组并根据国际骨关节炎研究协会制定的OARSI评级评估软骨破坏情况;采用免疫组织化学技术分析软骨标本中沉默信息调节因子1(SIRT-1)和淋巴增强因子1(lymphocyte enhancer factor 1,LEF-1)的表达情况。然后选取72只8周龄雌性C57BL/6J小鼠,使用内侧半月板不稳定术(Destabilization of the medial meniscus,DMM)造成小鼠膝关节骨关节炎。将其随机分为正常组(sham)、造模组(model)和造模后打药组(srt),每个分组根据造模后时间又分为造模后2周(2w)组和造模后8周(8w)组。采用番红O固绿染色OARSI评级评估小鼠膝关节软骨标本膝关节的退变程度;根据免疫组织化学技术评估软骨标本中SIRT-1、β-catenin、LEF-1、MMP-13以及Collegan Ⅱ的表达情况;根据免疫组织荧光技术评估标本中β-catenin、LEF-1和MMP-13的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)评估小鼠软骨标本中β-catenin和LEF-1的mRNA表达情况。结果 人软骨标本:根据番红O固绿染色结果显示,与轻度相比,中度组和重度组标本的软骨层结构破坏,软骨细胞数量减少且细胞肥大,软骨面不连续,其OARSI评级升高,其中重度组软骨标本软骨损伤严重,OARSI评级最高;根据免疫组织化学技术分析得出,与sham2w组和sham8w组相比,model 2w组和model 8w组的软骨标本中β-catenin、LEF-1和MMP-13的表达明显上升,SIRT-1和Collegan Ⅱ表达明显下降(P<0.05),srt 2w组和srt 8w组结果介于sham组和model组之间;根据免疫荧光技术分析得出,与sham 2w组和 sham8w 组相比,model 2w 组和 model 8w 组的β-catenin、LEF-1 和 MMP-13 的表达均明显升高,而srt 2w组和srt 8w组的结果介于sham组和model组之间;根据实时qPCR结果显示:与sham 2w组和sham 8w组相比,model 2w组和model 8w组的β-catenin的mRNA表达量明显降低,LEF-1的mRNA表达明显增高,相比之下,srt 2w组和srt 8w组的结果介于sham组和model组之间。结论:SIRT-1可能通过调节OA中LEF-1及相关炎性因子的表达,进而发挥软骨保护作用。
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