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猪伪狂犬病(porcine pesudorabies,PR)是由猪伪狂犬病毒(porcine pesudorabies virus,PRV)引起的一种高度接触性传染病,它能引起怀孕母猪流产、产死胎和木乃伊,成年猪咳嗽、喘气、消瘦,哺乳仔猪出现神经症状、呕吐、拉稀等,该病对猪群的健康危害很大。近年来,由于伪狂犬病毒变异株的流行,使得伪狂犬病的防控工作更加困难,许多免疫了 gE基因缺失苗的规模化猪场仍爆发该病。为了解广东省猪伪狂犬病野毒株的基因变异和遗传演化情况,并且开展伪狂犬病的快速检测方法的研究,以便于该病的防控,本论文进行了以下几个方面研究:1.广东省猪伪狂犬病毒的分离鉴定本实验从广东省佛山市的疑似发生伪狂犬病的某猪场采集病料,通过对病料组织的PRV-gE基因的PCR扩增,初步确定了该猪场为PRV感染。接着筛选出伪狂犬病毒阳性的组织病料作为分毒材料。将阳性病料接种在非洲绿猴肾细胞(Vero)上传代培养,通过对细胞培养液猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、蓝耳病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV)、圆环病毒2型(Porcircovirus type 2,PCV2)的PCR检测,结果显示CSFV、PCV2和PRRSV的PCR扩增结果均为阴性,PRV的PCR扩增结果为阳性,说明从病料中分离到PRV毒株无这些病原体存在。分离的病毒在Vero细胞上盲传5代后,可引起细胞出现稳定的细胞病变,测定TCID50为10-7.5/0.1mL。接着对分离毒株进行电镜观察、小白鼠接种实验及gE基因序列测定、分析,进一步鉴定了该病毒为PRV,并命名为PRVFS-2015株。2.PRVFS-2015株的gE、gC和TK基因测序及分析对PRVFS-2015株的gE、gC和TK基因进行扩增及序列测定、分析。结果显示,FS-2015株的gE、gC和TK基因与国内外PRV参考毒株的核酸相似性在97.5%～99.7%、95.8%～100%和99.4%～100%,氨基酸的相似性在95.3%～99.7%、92.3%～100%和99.1%～100%。氨基酸变异位点分析表明FS-2015株的gE、gC和TK基因均有位点突变。遗传进化分析表明FS-2015株与国内近几年分离的PRV变异株GY、ZJ01、HB1201,HN1201、JS2012、BJ/YT和BP属于同一分支,亲缘关系近;与PRV经典株Kaplan、Becker、NIA3、Kolchis、Bartha、Yangsan、Min-A、SS和 SL株的亲缘关系较远,基因变异较大。3.伪狂犬病毒双重PCR检测方法建立本研究针对PRVgE和gB基因序列,分别设计了2对引物,经过PCR反应条件和体系的优化,最终建立了PRV的双重PCR检测方法。通过PCR特异性、灵敏性实验表明,该双重PCR检测方法对PRV能扩增出gE(316 bp)和gB(432 bp)目的片段,对其他参考毒株扩增结果均为阴性,对PRVgE和gB核酸检测的敏感性分别为3.3×103 copies/μL和4.4×103 copies/μL。应用本研究建立的双重PCR方法对80份病猪组织进行PRV检测,结果显示PRV野毒感染阳性率是45%。