论文部分内容阅读
Ghrelin是1999年由日本科学家Kojima从大鼠胃中分离出来,是生长激素促分泌素受体(GHS-R)的天然配体,被认为是一种脑肠肽。目前,Ghrelin蛋白在绵羊卵泡颗粒细胞中表达已被充分肯定,但是Ghrelin mRNA在颗粒细胞中的表达一直未见报导,鉴于颗粒细胞可能在卵泡发育过程中对卵母细胞有积极作用,且排卵后颗粒细胞为黄体细胞主要前身,本研究应用RT-PCR方法、实时荧光定量RT-PCR技术,以及体外成熟培养技术和细胞培养技术系统的研究了颗粒细胞Ghrelin mRNA的表达情况,具体结果如下:1.应用RT-PCR技术,从蒙古绵羊卵泡颗粒细胞中成功获得Ghrelin部分基因片段(233bp),经序列测定和基因序列分析确认该产物为Ghrelin cDNA,并且该cDNA包含231bp的开放读码框(ORF),该ORF编码77个氨基酸的绵羊Ghrelin前原肽。首次证实了Ghrelin mRNA在蒙古绵羊卵泡颗粒细胞存在。2.实时荧光定量RT-PCR结果表明,Ghrelin mRNA相对表达量在大卵泡(3-5mm)的卵丘细胞和壁层颗粒细胞中无显著差异。3.卵丘细胞Ghrelin mRNA相对表达量在不同成熟培养时间及成熟过程中在LH、FSH和E2单一激素刺激下都是逐渐降低的。4.初步探讨了体外培养条件下颗粒细胞拟黄体化过程中Ghrelin mRNA的表达情况,结果表明,稳定生长的颗粒细胞Ghrelin mRNA相对表达量在前6d无显著变化,但到第9d显著降低并一直持续到第12d,且到第12d时Ghrelin mRNA的相对表达量与发情后第3d卵巢上黄体的黄体细胞Ghrelin mRNA的相对表达量一致。