肿瘤是当今社会严重威胁人类健康的最主要疾病之一，寻找治疗肿瘤的有效方法是医学工作者的一个非常重要的课题。由于肿瘤组织存在主动的免疫逃逸机制，因此目前的多种免疫治疗方法效果并不明显。肿瘤细胞针对机体的抗肿瘤免疫，采取多种方法逃避免疫清除，其中PD-L1(B7-H1)/PD-1信号系统和调节性T细胞是肿瘤逃避免疫清除最为重要的两种途径。B7-H1在多种肿瘤细胞及其相关细胞表面高表达；而肿瘤浸润的T淋巴细胞中Treg细胞的比例也异常升高。B7-H1与PD-1结合，产生免疫抑制性信号；而Treg细胞则通过直接或间接的免疫抑制作用，降低肿瘤特异性T淋巴细胞的活性，帮助肿瘤逃避免疫清除。最新的研究发现，B7-H1分子是诱导型调节性T淋巴细胞发育和功能维持的重要分子，单独的B7-H1信号即可以将初始CD4+CD25-T细胞转化成Treg细胞，发挥免疫抑制作用。但在肿瘤免疫逃逸过程中，B7-H1发挥免疫抑制作用是否通过，或多大程度上通过诱导Treg细胞而实现的，目前尚没有答案。本课题拟通过胶质瘤细胞系与na ve T细胞的共培养，研究肿瘤细胞表达的B7-H1是如何通过调节Treg细胞来实现肿瘤的免疫逃逸；并通过干预肿瘤B7-H1的表达，建立抑制肿瘤免疫逃逸的新思路。该研究结果可以深入了解肿瘤的免疫逃逸机理，从而寻找到克服肿瘤免疫逃逸的方法，提出新的肿瘤治疗策略，对提高肿瘤免疫清除和治愈肿瘤具有非常重要的理论和实际应用价值。目的：阐明肿瘤细胞表达B7-H1分子发挥免疫抑制作用与诱导Treg细胞产生的关系，从而进一步阐明B7-H1分子的肿瘤免疫抑制机理，探索干涉肿瘤细胞B7-H1分子对抑制肿瘤免疫逃逸的作用。方法：1.分别利用免疫组织化学法和免疫荧光法检测脑胶质瘤临床标本中的B7-H1分子的表达情况及Treg细胞在肿瘤中的浸润。2.用流式细胞仪检测人胶质瘤细胞系中B7-H1分子的表达，并挑选出高表达B7-H1分子的细胞株。3.构建含针对B7-H1分子的shRNA慢病毒表达载体，感染高表达B7-H1分子的胶质瘤细胞株，利用western blot和qRT-PCR检测其干涉效果。4.在正常人静脉血中分离出外周血单个核细胞(PBMC)，然后利用免疫磁珠法分选出na ve T细胞，并检测分选纯度。5.用CD3和CD28抗体刺激na ve T细胞，使其活化。6.把干涉B7-H1分子表达的胶质瘤细胞和正常表达B7-H1分子的胶质瘤细胞分别与从人血中分离出的na ve T细胞共培养，然后用Treg细胞检测试剂盒检测na ve T细胞向Treg细胞分化的程度。结果：1.我们取得10例胶质瘤标本(未分级)，用免疫组化染色观察到了B7-H1分子在7例中都有表达。并且3例Treg细胞浸润较多的组织其B7-H1分子的表达也呈阳性。2.我们运用流式细胞仪检测了5株人脑胶质瘤细胞系中B7-H1的表达，发现在其中三株都有较高表达。并选取U251细胞进行后续试验。3.分选出的na ve T细胞，经过CD3和CD28抗体的共刺激，观察到T淋巴细胞的增殖，说明na ve T细胞得到成功活化。4. TGF-β在诱导分化Treg细胞的过程中发挥着重要的作用。5. B7-H1可以协同TGF-β促使naive T细胞向Treg细胞方向分化。主要结论：本实验在细胞水平证实了B7-H1分子能够促进na ve T细胞向Treg细胞方向的分化，而Treg细胞负向调控所有适应性免疫，对于肿瘤的免疫逃逸具有重要的贡献作用。肿瘤组织中的高表达的B7-H1分子促进na ve T细胞向Treg细胞的分化，后者分泌的一些细胞因子能引起局部的免疫抑制，从而降低免疫系统对肿瘤的清除作用。该实验进一步了解了肿瘤相关B7-H1分子和Treg在肿瘤免疫抑制中的相互作用，为提出新的治疗策略，突破肿瘤免疫逃逸这一治疗障碍打下基础。