目的:肝细胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范围内发病率较高的恶性肿瘤。目前HCC的主要治疗方法是手术切除,一线临床药物有索拉非尼、仑伐替尼。随着分子生物学和肿瘤基因组学的研究进步,有关HCC发生发展的分子生物学机制越来越多的被证实,因此作用于相关靶点药物的发现与研究具有重要的临床意义。通过本课题组的前期研究发现,七叶皂苷钠(Sodium aescinate)具有抑制肝癌细胞系生长增殖的作用,但作用机制尚不明确。EIF4A1作为真核细胞起始因子复合物的重要组成部分,已有部分研究发现其表达状况与许多肿瘤的发生发展具有相关性,但有关EIF4A1与HCC的关系尚无具体研究。因此我们推测EIF4A1的表达状况与HCC的发生发展可能存在相关性,且七叶皂苷钠可通过影响EIF4A1的表达抑制肝癌细胞系的增殖。希望通过本次研究完善七叶皂苷钠抑制肝细胞系增殖的机制,为HCC治疗的研究提供一条新的思路。方法:(1)收集组织标本及对应病人的临床信息,组织标本进行石蜡包埋、切片。通过免疫组织化学染色检测HCC患者的肿瘤及癌旁标本中EIF4A1的表达差异,并结合临床数据和随访信息分析其相关性。(2)Hep G2、Human L02细胞系培养。(3)通过Western Blot检测两种细胞系经七叶皂苷钠处理后EIF4A1蛋白的表达变化,同时检测索拉非尼对肝癌细胞系EIF4A1表达的影响。(4)通过细胞免疫荧光检测两种细胞系经七叶皂苷钠处理后细胞内EIF4A1蛋白的表达变化。(5)通过q PCR检测两种细胞系经七叶皂苷钠处理后EIF4A1在m RNA水平的表达变化。(6)Annexin V-FITC/PI双染标记法检测七叶皂苷钠对两种细胞系凋亡率的影响。(7)Transwell迁移实验检测七叶皂苷钠对两种细胞系迁移能力的影响。(8)MTT实验验证索拉非尼对肝癌细胞系的抑制作用。结果:(1)相较于癌旁组织,肝癌组织中EIF4A1表达量明显偏高,且EIF4A1的表达与患者的肿瘤分化程度及肿瘤直径存在相关性。生存分析结果显示EIF4A1的表达状况与病人的术后生存期存在相关性。(2)WB结果显示Hep G2细胞系经七叶皂苷钠(40mmol·L-1)处理后,相较于对照组,加药组的EIF4A1的表达量明显降低;而正常肝细胞系Human L02经七叶皂苷钠(40mmol·L-1)处理后,其加药组与对照组相比,EIF4A1的表达无差异。(3)细胞免疫荧光结果显示七叶皂苷钠(40mmol·L-1)处理Hep G2细胞系后,EIF4A1在细胞内的表达明显降低。而在正常肝细胞系中,加药组与对照组表达无明显差异。(4)q PCR结果显示七叶皂苷钠(40mmol·L-1)处理Hep G2细胞系后,与对照组相比EIF4A1在m RNA水平的表达明显降低,但在正常肝细胞系中无此差异。(5)Annexin V-FITC/PI双染标记法结果显示,Hep G2细胞系经七叶皂苷钠(40mmol·L-1)处理后其凋亡率明显增高,而七叶皂苷钠对正常肝细胞系的凋亡率无影响。(6)Transwell迁移实验结果显示,七叶皂苷钠(40mmol·L-1)可降低Hep G2细胞系的迁移能力,但其对正常肝细胞系的迁移能力无影响。(7)MTT结果显示索拉非尼可抑制Hep G2细胞系的增殖,且具有浓度依赖性。通过WB实验发现,用索拉非尼(10mmol·L-1)处理Hep G2细胞系后,加药组与对照组相比,EIF4A1的表达无明显差异。结论:EIF4A1的高表达与HCC的发展具有相关性且七叶皂苷钠可能通过影响EIF4A1的表达抑制肝癌细胞系的生长、迁移和增殖,而目前肝细胞癌一线治疗药物索拉非尼并无此作用。