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目的:通过细胞实验,探讨20(S)-人参皂苷Rg3对铜转运相关蛋白介导的奥沙利铂药物敏感性的影响以及相关机制,以期为提高奥沙利铂疗效和优化中西医结合治疗肝癌方案提供一定参考。方法:以人肝癌MHCC97H细胞株为观察对象,采用MTT法检测MHCC97H细胞对20(S)-人参皂苷Rg3、奥沙利铂的药物敏感性;根据药物对细胞增殖的抑制情况和药物敏感性实验研究要求,计算出两药联合所需的适宜浓度,再用MTT法检测MHCC97H细胞对奥沙利铂联合低浓度20(S)-人参皂苷Rg3后的敏感性变化,并通过计算q值判断药物联合效果和选择进行后续实验。应用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测各组 MHCC97H 细胞中 Ctr1、Atox1、ATP7A 和 ATP7B 的mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Westernblotting)检测各组MHCC97H细胞中Ctr1、Atox1、ATP7A和ATP7B的蛋白表达情况。结果:在MTT检测法的实验中,结果显示20(S)-人参皂苷Rg3、奥沙利铂两种单药分别对MHCC97H细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05),并且对MHCC97H细胞增殖的抑制作用表现出剂量和时间依赖性。接近20(S)-人参皂苷Rg3最大无毒性剂量的浓度为100μM,不同浓度的奥沙利铂与之联合后对人肝癌MHCC97H细胞增殖的抑制作用明显增强(P<0.05),q值显示奥沙利铂与低浓度20(S)-人参皂苷Rg3的联合效果均表现为协同或相加作用。RT-PCR法和Western blotting法检测不同浓度奥沙利铂与低浓度20(S)-人参皂苷Rg3(100μM)联合后各组MHCC97H细胞中Ctr1、Atox1、ATP7A、ATP7B表达情况,结果发现:(1)与对照组相比,奥沙利铂单药组、奥沙利铂与20(S)-人参皂苷Rg3联合组中的Ctr1mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),20(S)-人参皂苷Rg3组的Ctr1mRNA和蛋白表达无明显变化;但是与奥沙利铂单药组比较,联合组中的Ctr1mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);(2)奥沙利铂单药组、联合组的Aox1mRNA和蛋白表达与对照组相比无明显变化(P>0.05);(3)联合组与奥沙利铂单药组相比,该组中ATP7A和ATP7B的mRNA和蛋白表达均显著下降(P<0.05),而奥沙利铂单药组与对照组相比无明显变化(P>0.05),联合组比空白对照组降低(P<0.05)。结论:20(S)-人参皂苷Rg3、奥沙利铂单药均能有效抑制人肝癌MHCC97H细胞的增殖,低浓度的20(S)-人参皂苷Rg3单药对人肝癌MHCC97H细胞增殖抑制作用很小,但用于药物联合后能够明显增强肝癌细胞对奥沙利铂的药物敏感性,其机制可能与低浓度20(S)-人参皂苷Rg3 一定程度上阻止奥沙利铂诱导Ctr1下调和降低ATP7A、ATP7B表达有关。