稀释液对神经干细胞影响的研究

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目的:尽管稀释液广泛应用于神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的分离、收集、检测、处理、保存、储存运输以及移植分布等过程中,但稀释液对NSCs生物学特性和损伤修复功能的影响尚不清楚。在本次实验中,我们研究了稀释液对NSCs的影响。  方法:在4℃条件下,从胚胎第14.5d小鼠皮层分离的NSCs被多种常用稀释液[包括0.9%生理盐水(Saline)、0.01M磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate-bufferedsaline,PBS)和人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)]处理不同时间段。NSCs增殖培养基(proliferation culture media, PCM)作为对照处理液。处理的NSCs被原位注射到创伤性脑损伤(traumatic brain injury, TBI)小鼠的损伤部位。通过台盼蓝染色法检测各组细胞的活力。通过BrdU法测定细胞增殖。应用TUNEL法检测细胞凋亡。应用免疫细胞化学染色方法检测NSCs及其分化。通过免疫印迹技术检测p53,cyclin E1,Fas-L,caspase-3的蛋白含量。  结果:在体外,稀释液处理的NSCs呈现出时间依赖的存活与增殖能力下降。稀释液处理后,进入S期NSCs减少与p53蛋白水平上调和cyclinE1蛋白水平下调密切相关。此外,稀释液处理可诱导NSCs凋亡。在凋亡的NSCs中,Fas-L和caspase-3活化片段表达水平上升,表明死亡受体途径参与稀释液处理后的NSCs凋亡过程。另外,经Saline处理的NSCs向神经元方向分化受阻,这提示Saline处理不利于神经干细胞向神经元方向分化。在体内,与PCM处理的NSCs移植对照组小鼠相比,在稀释液处理的NSCs移植组中NSCs介导的功能恢复呈现显著抑制。  结论:稀释液处理可明显改变NSCs的生物学特性及其对TBI的治疗作用。我们的结果表明,深入了解稀释液处理对NSCs的影响,对开发长期有效的NSCs移植治疗策略至关重要。
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