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目的:通过研究Elp3过表达和Elp3干扰表达的HepG2细胞株以及Elp4过表达和Elp4干扰表达的HepG2细胞株的迁移侵袭能力的改变,探讨Elp3和Elp4对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法:1.鉴定Elp3干扰质粒GV248-Elp3i和Elp4干扰质粒GV248-Elp4i,以及Elp3过表达质粒pFLAG-CMV4-Elp3o和Elp4过表达质粒p FLAG-CMV4-Elp4o。2.确定肝癌细胞HepG2的Puror和G418药物筛选浓度。3.转染干扰质粒后的Hep G2细胞经Puror筛选得到Elp3稳定干扰细胞株和Elp4稳定干扰细胞株;转染过表达质粒后的HepG2细胞经G418筛选得到Elp3过表达稳定细胞株和Elp4过表达稳定细胞株。4.通过RT-PCR、Real-time PCR和Western blot鉴定各组细胞株中外源质粒的整合,检测Elp3和Elp4的mRNA和蛋白表达水平。5.划痕实验,Transwell侵袭迁移实验检测各细胞株迁移和侵袭能力的改变。6.Real-time PCR检测各细胞株中MMP-2、MMP-9和Paxillin的mRNA表达水平。7.Western blot检测各细胞株中PI3K、AKT、p-AKT、MMP-2、MMP-9和Paxillin的蛋白表达水平。8.Western blot检测瞬时转染不同剂量Elp3过表达质粒pFLAG-CMV4-Elp3o、Elp4过表达质粒pFLAG-CMV4-Elp4o、Elp3干扰质粒GV248-Elp3i和Elp4干扰质粒GV248-Elp4i的细胞株中PI3K、AKT和p-AKT的蛋白表达水平。9.通过Western blot检测PI3K、AKT和p-AKT的蛋白表达水平确定肝癌细胞HepG2的PI3K/AKT途径抑制剂LY294002的浓度。10.划痕实验,Transwell侵袭迁移实验检测抑制剂LY294002处理后的各细胞株迁移和侵袭能力的改变。11.real-timepcr检测抑制剂ly294002处理后的各细胞株中mmp-2和mmp-9的mrna表达水平。12.westernblot检测抑制剂ly294002处理后的各细胞株中pi3k、akt、p-akt、mmp-2和mmp-9的蛋白表达水平。结果:1.质粒经双酶切鉴定,成功检测到elp3过表达质粒:pflag-cmv4-elp3o中1601bp的重组elp3条带;elp4过表达质粒:pflag-cmv4-elp4o中1613bp的重组elp4条带;elp3干扰质粒:gv248-elp3i中44bp的shrna条带;elp4干扰质粒:gv248-elp4i中44bp的shrna条带。2.hepg2细胞于含不同浓度g418或puror的培养基中培养14天后,得出50ng/μl为puror药物筛选浓度,600ng/μl为g418药物筛选浓度。3.hepg2细胞转染各组质粒24h后,加入g418或puror筛选14天,经单克隆挑取和单克隆扩大培养及鉴定,得到目标细胞株。4.划痕实验和transwell实验证明了elp3和elp4过表达能促进肝癌细胞的迁移能力和侵袭能力,干扰elp3和elp4则抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。5.real-timepcr检测发现elp3和elp4过表达能增加肝癌细胞中的mmp-2、mmp-9和paxillin的mrna表达水平,干扰elp3和elp4则抑制肝癌细胞中的mmp-2、mmp-9和paxillin的mrna表达水平6.westernblot检测各细胞株中发现elp3和elp4过表达能增加肝癌细胞中p-akt、mmp-2、mmp-9和paxillin的蛋白表达水平,干扰elp3和elp4则抑制肝癌细胞中的p-akt、mmp-2、mmp-9和paxillin的蛋白表达水平。7.westernblot检测瞬时转染不同剂量elp3过表达质粒pflag-cmv4-elp3o、elp4过表达质粒pflag-cmv4-elp4o、elp3干扰质粒gv248-elp3i和elp4干扰质粒gv248-elp4i的细胞株中pi3k、akt和p-akt的蛋白表达水平,得出elp3和elp4的表达量与akt磷酸化水平两者间存在剂量效应。8.划痕实验,transwell侵袭迁移实验检测,加入抑制剂ly294002处理后,能抑制各细胞株迁移和侵袭能力。9.Real-time PCR检测抑制剂LY294002处理后,HepG2细胞株、Elp3过表达细胞株和Elp4过表达细胞株中MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平降低,Elp3干扰细胞株和Elp4干扰细胞株中MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平没有明显变化。10.Western blot检测抑制剂LY294002处理后的各细胞株中p-AKT、MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平均降低。结论:1.Elp3和Elp4过表达可以促进肝癌细胞的迁移和侵袭,而干扰Elp3和Elp4表达可以抑制这一现象。2.Elp3和Elp4可以通过PI3K/AKT途径来调节肝癌细胞的迁移和侵袭。