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黄瓜花叶病毒(CMV)是世界上流行最广和研究较多的植物病毒之一,每年在世界范围内对辣椒生产造成严重的危害和损失。目前关于辣椒抗CMV遗传和分子标记筛选的研究报道较少。本文以Vc16a、SS79与SS69构建F2群体,通过对辣椒CMV遗传的研究,揭示其遗传规律,用ISSR方法筛选辣椒与抗CMV基因连锁的分子标记,为辣椒抗CMV育种提供遗传学与分子生物学的理论依据。1.辣椒抗CMV遗传分析:采用植物数量性状单个世代群体遗传研究方法,对F2世代苗期和成株期发病情况进行分析,研究辣椒抗CMV遗传规律。辣椒苗期和成株期对CMV抗性遗传符合由两对主基因控制的模型,但主基因间表现的作用有所不同。在苗期,05CM-8、05CM-9以及05CM-11的遗传模型都是B-1模型,即主基因间表现为加性-显性-上位性作用;05CM-10符合B-2模型,即主基因间表现为加性-显性作用。05CM-8、05CM-10抗CMV主基因遗传率均为100%;05CM-9和05CM-11抗CMV主基因遗传率也较高,分别为93.97%、99.33%。在成株期也符合由两对主基因控制的模型,但与苗期略有差别:05CM-8与05CM-10的遗传模型都是B-2模型,05CM-9与05CM-11遗传模型都是B-1模型。成株期05CM-8抗CMV主基因遗传率为100%, 05CM-10抗CMV主基因遗传率为95.04%,05CM-9和05CM-11抗CMV主基因遗传率分别为62.91%和61.32%。2.辣椒ISSR-PCR体系优化:采用4因素3水平[L9(3)4]正交实验设计,由Mg2+、Taq酶、引物和dNTPs组成,对ISSR-PCR体系进行优化,获得最优体系:20μL体系中Mg2+为1.5mmol/L、Taq酶1.5U、引物0.6μmol/L、dNTPs200μmol/L,1×Buffer,50ng模板DNA。3.辣椒与抗CMV连锁的ISSR分子标记筛选:应用BSA-ISSR技术建立F2代抗感池并筛选抗CMV标记。用40个ISSR引物对Vc16a和SS69及其F2抗感池进行扩增,其中I-3、I-10、I-13和I-34这4个引物在抗感池中扩增出具有多态性条带。这4个引物经F2代单株验证和连锁分析,表明引物I-13和I-34筛选出的标记存在连锁关系,遗传距离为16.3cM,该特异性片段约为1100bp,命名为I-131100;I-34与辣椒抗CMV抗病位点连锁,遗传距离为27.3cM,该特异性片段约为450bp,命名为I-34450。