猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是一种高度接触性肠道传染病,严重威胁着世界养猪业的发展。PED是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）感染引发的疾病,PEDV可以感染所有年龄段的猪,尤其是新生仔猪感染PEDV后会引起急性水样腹泻、呕吐、脱水,死亡率可高达100%。新生仔猪免疫系统发育不完善,需要通过母乳获得被动保护。当前PEDV商品化疫苗免疫母猪产生的高水平Ig G抗体不能对新生仔猪提供有效的保护,研究发现黏膜免疫应答产生的SIgA是防控PED的关键。SIgA的组成包括两分子单体Ig A,一条连接链（J链）和一个分泌成分（Secretory component,SC）。SC是多聚免疫球蛋白受体（pIgR）的胞外部分,是SIgA的特有成分,是区分SIgA与Ig A的重要标志。目前国内没有有效的商品化的检测试剂盒来检测母乳中的抗PEDV的SIgA水平,本研究以PEDV全病毒作为包被抗原,制备的抗猪pIgR单克隆抗体作为二抗,建立检测PEDV特异性SIgA ELISA检测方法,为PEDV疫苗黏膜免疫效果评价提供准确数据,为PEDV的防控提供有力手段。（1）为了制备猪源pIgR蛋白的单克隆抗体,对NCBI提供的猪源pIgR的胞外区基因序列进行了分析并设计引物,经过PCR、酶切、连接,将目的序列克隆入原核表达载体p ET-30a（+）,测序验证成功后,将带有目的片段的重组质粒转化入大肠杆菌（E.coli）BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析的方法获得了pIgR蛋白。（2）以上述表达的pIgR蛋白作为免疫原,将其与佐剂进行混合,对BALB/c小鼠进行免疫,使用PEG融合剂将小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,通过间接ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞,经过三次亚克隆筛选,共获得4株稳定分泌抗pIgR蛋白的单克隆抗体,同时制备了4株单克隆抗体的腹水。构建真核表达载体pc DNA3.1-pIgR以验证所制备的单克隆抗体的反应性,通过荧光共定位和Western blotting验证,4株单抗均可发生特异性反应。（3）为建立PEDV特异性SIgA ELISA检测方法,将PEDV全病毒进行纯化浓缩,作为包被抗原,以上述制备的抗猪pIgR单克隆抗体作为二抗,建立ELISA检测方法。经过条件优化:最佳抗原包被浓度为4μg/m L;最佳样品稀释度为1:2倍稀释;二抗最佳稀释度为1:1 000;最佳封闭液为2.5%的牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）;最佳显色时间为5 min。通过检测30份阴性乳汁样品,确定诊断方法的阴性阈值为0.474,阳性阈值为0.538。重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的可重复性。对该方法进行敏感性试验,将20份不同抗体水平的阳性乳汁样品进行2倍倍比稀释,同时用韩国安捷PED Ig A ELISA试剂盒进行检测,结果显示,建立的PEDV特异性SIgA ELISA检测方法的敏感性优于韩国安捷PED Ig A ELISA试剂盒的敏感性。随机选取36份乳汁样品进行检测,将建立的ELISA检测方法与韩国安捷PED Ig A ELISA试剂盒进行对比,两种检测方法的符合率为88.9%。