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刺参(Apostichopus japonicus)又称仿刺参,属于棘皮动物门、海参纲,是一种高蛋白、低糖、低脂肪、无胆固醇的重要的养殖经济水产动物。温度是影响刺参生长、发育、繁殖的最主要环境因子之一,当海水温度升高到一定范围(20-25℃)后,刺参出现摄食停止、活动降低、消化道退化、体质量减轻、代谢速率降低等特征,处于夏眠状态。因此,开展高温胁迫条件下,刺参内在精细分子机制,特别是高温胁迫下磷酸化蛋白的研究,对刺参养殖业的健康发展具有重要的实践意义。 本研究主要内容包括:⑴在刺参高温刺激168小时的体腔液中,我们共鉴定了55不同的磷酸化蛋白,其中43个磷酸化蛋白符合 FDR<1%,并进行后续的差异表达分析。与对照组相比,有16个磷酸化蛋白存在差异表达,其中11个磷酸化蛋白含量下降,4个磷酸化蛋白含量上升。值得注意的是,我们发现一些与代谢相关的蛋白在高温下磷酸化水平发生了变化,例如 IV型胶原α3结合蛋白,N酰基磷脂酰乙醇胺磷脂酶 D,NDRG1蛋白、p44/42MAPK等。另外,有3个分子伴侣的表达在25℃时都上升,它们分别是蛋白二硫异构酶,葡萄糖调节蛋白78和热休克蛋白90。通过Western blot进一步分析 p44/42MAPK的空间表达情况,结果表明 p44/42MAPK存在于刺参的体腔液,肠,肌肉和呼吸树。然而 p44/42MAPK的磷酸化蛋白只存在体腔液和肌肉中。对 p44/42MAPK和下游分子 p90RSK的表达模式分析发现,急性升温下,他们的磷酸化水平在高温组受到抑制。而在高温持续阶段,p44/42MAPK和下游分子 p90RSK的表达模式相对一致,都出现前期上调表达,后期下降甚至抑制的现象,并且不同组织表达模式有所区别。