【摘 要】
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禽类卵泡的发育与其产蛋性能密切相关,而颗粒层细胞(granulosa cell,GC)与膜层细胞(theca cell,TC)是卵泡的重要组成部分,它们的互作对卵泡正常生长发育有着重要的意义,但禽类GC与TC的互作机制研究还十分有限。因此,本研究以天府肉鹅母系母鹅为试验对象,探究鹅卵泡发育过程中颗粒层与膜层组织的动态发育特点,构建各阶段GC与TC体外共培养模型,检测互作对各阶段GC与TC生理功能的
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禽类卵泡的发育与其产蛋性能密切相关,而颗粒层细胞(granulosa cell,GC)与膜层细胞(theca cell,TC)是卵泡的重要组成部分,它们的互作对卵泡正常生长发育有着重要的意义,但禽类GC与TC的互作机制研究还十分有限。因此,本研究以天府肉鹅母系母鹅为试验对象,探究鹅卵泡发育过程中颗粒层与膜层组织的动态发育特点,构建各阶段GC与TC体外共培养模型,检测互作对各阶段GC与TC生理功能的影响,并利用转录组和蛋白组技术分析GC与TC的互作机制。主要研究结果如下:1.卵泡组织学结果显示,颗粒层与膜层的组织形态随着卵泡的发育发生着明显的变化。在2mm以下卵泡中,膜层结构未完全形成;而2~10mm、F4~F2与F1卵泡间颗粒层与膜层组织的形态、厚度均存在明显差异。2.利用transwell系统建立了等级前(2~10mm)、等级(F4~F2)和F1卵泡GC与TC体外共培养模型。在共培养模型中,各阶段GC与TC的细胞活性、脂质代谢与DNL、类固醇合成和增殖凋亡通路均发生了不同趋势的显著变化。3.转录组和蛋白质组结果显示,在共培养组颗粒层细胞(Co-culture group granulosa cell,C-GC)vs.单培养组颗粒层细胞(Mono-culture group granulosa cell,M-GC)中,48h DEG有1338个,96h DEG有359个,96h DEP有455个;而在共培养组膜层细胞(Co-culture group theca cell,C-TC)vs.单培养组膜层细胞(Mono-culture group theca cell,M-TC)中,48h DEG为423个,96h DEG 539个、DEP74个。表明C-GC比C-TC获得的差异基因和蛋白数更多。4.GO与KEGG分析表明,C-GC的DEG与DEP主要富集在与增殖凋亡相关的c GMP-PKG、TGFβ和PI3K等信号通路,与脂质代谢相关的Phospholipase D和PPAR等信号通路。C-TC的DEG与DEP则主要富集在与增殖凋亡相关的Wnt和PI3K等信号通路,与脂质代谢相关的glycerolipid代谢机制和AMPK、PPAR等信号通路。5.结合因子-受体表达趋势分析表明,C-TC中BMP4、VIP和CXCL14与C-GC中BMPR2-TGFβ、VIPR2-c AMP和CXCR4-PI3K受体及其下游通路的基因/蛋白变化的时间、趋势高度一致;而C-GC中VEGFA与C-TC中VEGFR2-PI3K/RAP1受体及其下游通路的基因/蛋白变化的时间、趋势高度一致。综上,本研究解析了GC与TC的互作机制,BMP4-BMPR2、VIP-VIPR2、CXCL14-CXCR4和VEGFA-VEGFR2通路在GC与TC互作过程中对增殖凋亡、类固醇合成等生理功能的发挥着重要作用,为进一步解析鹅卵泡发育机制奠定了基础。
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