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酪氨酸酶（Tyrosinase,EC 1.14.18.1）是一种含有双核铜离子的金属氧化酶,是黑色素合成中的关键限速酶,广泛存在于微生物、动植物以及人体中。酪氨酸酶的活性表达直接影响人类皮肤的颜色,而活性表达过量或减退都会导致皮肤色素性疾病的发生,在植物中由于酶促褐变还会影响水果和蔬菜的品质。因此,研究酪氨酸酶的活性是调控黑色素生成的重点,然而在天然化合物中,植物中的黄酮是酪氨酸酶抑制剂研究的热点。葛根系豆科植物野葛（Pueraria lobata（Willd.）Ohwi）或甘葛藤（P.thomsonii Benth）的干燥根,富含异黄酮类化合物,具有保护心脑血管、降血压、抗肿瘤等生理活性。异黄酮属于黄酮的亚类,因此本文以葛根异黄酮为研究对象,采用浊点萃取-高效液相色谱同时测定葛根中6种异黄酮的方法,对于葛根中最重要的活性成分且含量最高的葛根素,展开了其对酪氨酸酶活性影响的深入研究,根据葛根素具有显著抑制酪氨酸酶单酚酶活性,能够抑制黑色素的生成,开发一种葛根素美白保湿原液,为葛根在化妆品中的应用提供数据支撑。1.建立一种浊点萃取葛根异黄酮,高效液相色谱同时测定葛根中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木苷、染料木素、芒柄花素6种异黄酮的方法。以表面活性剂Triton X-100作为萃取溶剂,考察了Triton X-100质量浓度、液固比、平衡时间、平衡温度、Na Cl添加量五个因素对萃取结果的影响。根据单因素结果,进一步利用正交试验优化萃取工艺,通过方差分析得到最佳萃取条件为:Triton X-100质量浓度0.07 g/m L、液固比80:1（m L/g）、Na Cl添加量0.6 g、平衡时间为40 min、平衡温度为70℃,在此条件下获得葛根6种异黄酮总萃取量为8.92 mg/g,RSD为1.36%。2.利用体外测定酪氨酸酶活性的方法,以曲酸作为对照,分别研究了以L-酪氨酸和L-dopa为底物,葛根素对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性的影响,结果表明:葛根素对单酚酶具有明显的抑制活性,半抑制浓度IC50为0.537 mg/m L,但葛根素对二酚酶表现为激活活性。利用酶动力学方法,分别研究葛根素对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制和激活机理,由Lineweaver-Burk双倒数作图分析,葛根素对单酚酶抑制为混合型抑制,对二酚酶激活为混合型激活。3.原液是近年来的一种新型护肤产品,具有成分单一、配方精简、功效直接的特点。由于葛根素对酪氨酸酶单酚酶具有显著的抑制活性,基于皮肤美白的机理,本着纯天然、安全、健康的原则,将多种优质保湿剂与葛根素有机糅合制备了葛根素美白保湿原液,在单因素结果的基础上,利用正交试验优化,通过方差分析得到最佳配比为:葛根素0.04%、透明质酸钠0.2%、1,3-丁二醇8%、1,2-己二醇1.5%。在此条件下制备的葛根素美白保湿原液符合QB/T 2660-2004的各项指标,并对其进行了安全性评价和功效评价,结果表明葛根素美白保湿对人体无明显的皮肤刺激性作用,具有优越的美白性和保湿性。