N-丁基二乙醇胺对钌联吡啶电化学发光分析系统的增效作用

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由于电化学发光(电化学发光)分析方法使用范围广、光学系统简单和操作容易,得到人们的广泛重视,目前研究和应用最广泛的是钌联吡啶(Ru(bpy)32+)-三丙胺(TPA)电化学发光体系。鉴于当前电化学发光检测的现状和满足实验室构建高效的电化学发光体免疫检测体系的需要,本论文在揭示Ru(bpy)32+电化学发光相关的反应机理的基础上通过采用新型共反应物和添加剂,探究增强电化学发光电化学发光检测灵敏度的途径,以构建新型基于流动注射装置的高效电化学发光免疫分析体系;并通过对乙型流感病毒进行免疫检测,验证该体系的优越性和可行性。为了更好的了解本论文的研究背景,绪论简要介绍了当前电化学发光研究的现状和目前增强Ru(bpy)32+电化学发光检测灵敏度的方法,以及乙型流感病毒常用检测方法。为了提高Ru(bpy)32+电化学发光检测灵敏度,实验对比研究了流动注射电化学发光系统下低浓度Ru(bpy)32+与三种常用胺类共反应物(N-丁基二乙醇胺,N,N-二丁基乙醇胺和三丙胺)的电化学发光响应情况,结果表明,Ru(bpy)32+/N-丁基二乙醇胺体系的电化学发光特性最佳。研究进一步对添加剂Triton X-100添加浓度进行优化,确定最优添加浓度为0.1%(v/v),并对该体系在流动注射电化学发光分析系统上进行检测条件优化。在电位1.8V,进样量150μL,推速30μL/s的最优检测条件下,获得Ru(bpy)32+的检出限(S/N=3)为5×10-10mol/L;线性范围为1×10-9mol/L5×10-7mol/L;重复性良好。为验证该体系的可行性和优越性,基于流动注射电化学发光分析系统,利用磁微球和生物素亲和素放大技术,初步建立乙型流感病毒的电化学发光免疫分析法(ECLIA),采用双抗体夹心ECLIA检测乙型流感病毒抗原的线性范围是0.55-17.5μg/ml,检出限达0.55μg/ml(S/N=3)。在电化学发光免疫分析仪上对其灵敏度、重复性、特异性等效能进行方法学评价。建立的ECLIA检测方法为快速、准确地检测乙型流感病毒提供了可靠的技术手段,为流感的诊断及疫情控制提供了技术保障。
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