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银屑病是一种病因及发病机制至今尚未阐明的常见炎症性皮肤疾病,共存于皮损内的神经性介质如神经肽类可能和相关细胞因子、趋化因子、粘附分子等以协同作用方式参与了银屑病独特的炎症和增生过程.近10余年的研究结果表明,神经肽类尤其是具有血管扩张作用的神经肽如P物质(substance P)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和血管活性肠肽等与银屑病皮损的组织病理表现密切相关,因而,有人提出神经源性炎症可能在其发病和病情维持过程中发挥重要作用.第一部分神经肽CGRP诱导角质形成细胞表达神经型一氧化氮合酶;一.目的:研究CGRP对体外培养KC株HaCaT细胞nNOS mRNA、蛋白表达和NO释放的调节作用,以及其受体抑制剂CGRP-8-37对CGRP作用的影响,为探讨CGRP和NO在银屑病神经源性炎症中的作用提供理论依据.二.方法:应用一氧化氮试剂盒(酶法)检测体外培养HaCaT细胞上清液中一氧化氮水平,逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学(SP)方法检测HaCaT细胞神经型一氧化氮合酶mRNA和蛋白的表达水平.四.结论:推测银屑病皮损内nNOS的过度表达可能与皮损内高水平的CGRP有关.CGRP诱导KC释放的神经型NO亦可参与皮肤神经源性血管扩张,促进神经源性炎症反应.第二部分细胞因子诱导角质开成细胞表达诱生型一氧化氮合酶;一.目的:研究炎症性细胞因子TNF-α协同IL-1β对体外培养KC株HaCaT细胞iNOS mRNA和蛋白表达的调节作用,以及地塞米松对TNF-α协同IL-1β对体外培养KC株HaCaT细胞iNOS mRNA和蛋白表达的调节作用,以及地塞米松对TNF-α和IL-1β作用的影响,探讨TNF-α和IL-1β在炎症性皮肤病如银屑病中的作用机制和地塞米松的治疗效应机制.二.方法:采用逆转录聚合酶链反应方法检测培养HaCaT细胞iNOS mRNA的表达,Western blotting和免疫组织化学(SP)方法检测iNOS蛋白表达情况.四.结论:推测银屑病皮损内iNOS的过度表达可能与同时存在的高水平炎性细胞因子如TNF-α、IL-1β有关;TNFα和IL-1β可能通过上调KC表达iNOS合成释放的NO参与皮肤免疫和炎症反应;地塞米松对炎症性皮肤病的治疗效应可能部分与其能抑制iNOS表达有关.第三部分:一氧化氮对角质形成细胞株HaCaT增殖和凋亡的影响;一.目的:研究不同浓度梯度NO供体硝普钠对体外培养KC株HaCaT增殖和凋亡的影响.二.方法:不同浓度梯度硝普钠处理细胞后,用MTT比色分析法分析HaCaT细胞的增殖变化;不同浓度硝普钠处理细胞36小时后,HE染色观察细胞形态变化,FITC标记的Annexin-V和PI双染荧光显微镜观察细胞凋亡的情况,流式细胞仪测定细胞凋亡比率.四.结论:NO供体硝普钠可抑制体外培养KC株HaCaT细胞增殖,并可促进HaCaT细胞凋亡.由于NO可显著下调正常和银屑病KC表达多种趋化因子,加之NO也可促进KC凋亡,提示NO制剂可以用于治疗银屑病.