人羊膜上皮细胞移植用于兔损伤声带组织修复的初步研究

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目的研究人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells, hAECs)移植入兔损伤声带组织内的生长分布特点,探索hAECs促进损伤声带修复再生的潜能。方法分离和培养人羊膜上皮细胞,利用慢病毒载体将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)基因转染至hAECs内。建立深及声韧带的兔声带损伤模型,设hAECs移植组即实验组(13侧声带)、损伤对照组(13侧声带)及正常对照组(4侧声带)。荧光显微镜下连续观察hAECs在声带内的存活、分布情况,免疫荧光染色观察hAECs在声带固有层内的分化情况。应用HE染色和免疫组化染色分析胶原纤维、纤维连接蛋白等主要细胞外基质在损伤后3月时的含量及分布。结果hAECs原代培养6d后呈铺路石样生长,移植入兔损伤声带组织后可在固有层内持续存活2个月,细胞呈纵向排列,有趋向性。声带损伤2月时,免疫荧光显示hAECs移植组肌细胞标志蛋白Desmin荧光阳性,提示hAECs向肌细胞分化。光镜观察下见hAECs移植后3个月,兔声带内胶原纤维密度和排布较损伤对照组改善,但未及正常。免疫组化染色示hAECs移植组纤维连接蛋白含量和分布介于损伤对照组和正常对照组之间。结论hAECs可在异种动物声带损伤组织内持续存活、生长,并有向声带组织分化的潜能,可促进声带损伤后的修复再生。
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