第一部分临床研究 目的：观察月经期应用具有清热解毒、活血通络作用的双花坤孕胶囊治疗慢性输卵管炎性不孕症临床疗效，并探讨作用机理。 方法：采用临床随机对照的方法，纳入标准为具有①所有患者均经子宫、输卵管碘油造影或两次输卵管通液，证实输卵管阻塞、不通畅或积水；②夫妇同居未避孕2年以上，配偶检查无异常或有生殖系统疾病经治后痊愈；③患者并符合中医湿瘀互结型为主，临床症状主要有腹痛、带下量多、经血有块、舌暗红或有瘀斑、苔白腻或黄腻等。将所选病例随机分为治疗1组和对照1、2组，每组各20例。三组患者在年龄、性别、病程等方面均无显著性差异。治疗组在月经期服用双花坤孕胶囊(银花、红花、三棱、莪术、丹参、香附、穿山甲、路路通、败酱草、薏苡仁等)。对照1组于非月经期服用双花坤孕胶囊。对照2组为西药治疗组(环丙沙星片)。对照1、2组均在月经期停用药物。各组治疗均以三个月为1个疗程，连续治疗1～2个疗程。观察指标：①治疗前后输卵管造影或通液检查通液情况；②随访两年妊娠情况。③临床主要症状改善的情况；④经期用药对月经的影响；⑤经期用药期间血雌、孕激素水平变化。疗效评定标准：①《中药新药治疗女性不孕症的临床研究指导原则》[1]中所列疗效评定标准：痊愈：治疗后两年内妊娠；无效：经连续治疗后两年内未妊娠。②输卵管造影或通液检查结果判断输卵管的疏通情况。分通畅、通而不畅、不通三级[2]。③腹痛、腰痛程度及疗效采用积分法。参照《中药新药治疗痛经的临床研究指导原则》[3]中的积分法。 结果：①输卵管再通情况：治疗组与对照组比较，再通率明显增高，有显著差异(P＜0.01)。②两年内受孕率比较：治疗组受孕率75％，对照1组受孕率55％，对照2组受孕率45％。治疗组与对照1、2组比较(P＜0.01)，治疗组显著优于对照1、2组。③对主要症状的影响：疼痛疗效比较，治疗组治疗后总有效率88.89％，对照2组总有效率53.85％，两组疼痛积分比较有显著差异；治疗组治疗前后比较，也有显著差异(P＜0.01)；治疗组与对照2组比较也有显著差异(P＜0.05)，治疗组显著优于对照1、2组。对带下量多症状，治疗组治疗后有效率88.24％，对照1组75％，对照2组73.33％。三组对治疗带下量多均有一定疗效。④经期用药期间血雌、孕激素无明显差异。 结论：本研究表明，于月经期采用中药双花坤孕胶囊治疗慢性输卵管炎性不孕症能改善输卵管阻塞，减轻疼痛、带下量多症状，其疗效优于对照1、2组。且月经期用药不影响月经期雌、孕激素水平变化、对月经期出血量无明显影响。观察结果，在行经期间，经血聚集胞宫，血脉充足，血室正开，此时服用具有清热解毒、活血通络作用的双花坤孕胶囊，使浊毒瘀血随血而排出，正符合中医理论“热从血出”的特点。该药无不良反应，并且具有简便、经济特点，是治疗慢性输卵管炎性不孕症的有效药物，值得进一步的研究开发。 第二部分实验研究 目的：观察双花坤孕胶囊对大鼠输卵管周围棉球肉芽肿生长的影响及炎性组织中PGE2含量的影响、双花坤孕胶囊的体外抑菌作用、小鼠对双花坤孕胶囊急性毒性反应的影响。以探讨双花坤孕胶囊的抑菌抗炎作用和毒性反应。 方法：1双花坤孕胶囊对大鼠输卵管周围棉球肉芽肿生长的影响 选用12～14周雌性SD大鼠40只，先将大鼠用乙醚麻醉，下腹部去毛，常规皮肤消毒。制备量为20mg的棉球，大小相等，高压灭菌后于每个棉球加入氨苄青霉素1mg/0.1ml，在50℃烤箱烤干备用。大鼠仰卧固定，左下腹部切口，将经上述制备的棉球植入输卵管周围，逐层缝合伤口。将手术后大鼠随机分为4组，双花坤孕胶囊1、2组分别应用不同剂量双花坤孕胶囊混悬液灌胃，妇金康组应用妇金康胶囊混悬液灌胃，生理盐水用等容积(2.5ml)生理盐水灌胃。各组每天灌胃一次，连续6天。颈椎脱臼法处死，分离肉芽肿及周围组织，取出棉球，于60℃烤箱放置12小时后，精密称重。观察双花坤孕胶囊对肉芽肿生长的影响。 方法：2双花坤孕胶囊对大鼠炎性组织中的PGE2含量、足趾肿胀度、足趾压痛的影响。 选用12～14周雌性SD大鼠40只，随机分为4组，双花坤孕胶囊1、2组分别应用不同剂量双花坤孕胶囊混悬液(2.5g/kg、5g/kg)灌胃，对照1组应用妇金康胶囊混悬液(3.8g/kg)，对照2组用等容积(2.5ml)5％阿拉伯胶生理盐水灌胃。各组每天灌胃一次，连用三天，于第三天用药后0.5小时测量大鼠左后足关节下体积，作为造模前值，于大鼠左后足趾腱下注射1％角叉菜胶0.1ml，各组于造模后1、2、4、6小时重复测量一次，比较各组足趾肿胀度的差异。并在此炎症模型时，测定各组注射角叉菜胶致炎症足对痛觉的敏感性。造模后6小时各指标测量完毕后，处死大鼠，在踝关节上0.5cm处剪下炎性肿胀足，剥皮称重、剪碎，生理盐水5ml浸润1小时，取出足爪，离心浸泡液，吸取上清液0.1ml，加0.5mol/LKOH一甲醇溶液2ml，在50℃下异构化20分钟，用早醇稀释至20ml，应用uv754紫外可见分光度仪，于波长为278nm处测定光密度值，以每克炎性组织相当的吸收光密度值表示PGE2含量。 方法：3.双花坤孕胶囊体外抑菌作用实验。 双花坤孕胶囊原方无菌水煎液1g/ml，临用前调PH至7.0，并按倍比稀释成10个浓度，另取一试管不加药物作为空白对照。将受试菌株培养16小时后，分别加入10个试管中，于37℃孵箱内培养24小时，取出观察细菌生长情况 方法：4.双花坤孕胶囊急性毒性实验影响。 选用昆明小鼠20只，雌雄各半。实验前小鼠禁食不禁水12小时，取双花坤孕胶囊28g/kg有剂量，灌胃给药1次，每10克小鼠体重0.4ml，观察给药后七天内小鼠活动、大便、小便及颜色、皮毛、肤色、呼吸、鼻腔、口腔分泌物、休重变化、死亡情况。 结果：1双花坤孕胶囊对大鼠输卵管周围棉球肉芽肿生长影响，结果表示：双花坤孕胶囊1、2组大鼠肉芽肿净重比生理盐水组明显减轻(p＜0.01)。亦比妇金康组为轻，有显著性差异。 2双花坤孕胶囊对大鼠炎性组织中PGE2含量、足跖肿胀度及压痛的影响，结果表示：①双花坤孕胶囊组大鼠炎性组织中PGE2含量较生理盐水级有明显减少(p＜0.05)，双花坤孕胶囊1、2组间，高剂量组5g/kg较低剂量2.5g/kg降低明显(p＜0.01).②双花坤孕胶囊组大鼠足跖肿胀度在造模后2、4、6小时与生理盐水组相比明显减轻(p＜0.05)，也比妇金康组足跖肿胀度明显减轻。③双花坤孕胶囊组在造模后2小时，开始出现明显镇痛作用，至6小时仍有明显镇痛作用(p＜0.05)。 3双花坤孕胶囊对小鼠急性毒性的影响，结果表示：双花坤孕胶囊混悬液给小鼠灌胃后，七天内小鼠活动、食欲、大便、小便及颜色、皮毛、肤色、呼吸均正常，鼻腔、口腔无异、分泌物、体重正常增长，无小鼠死亡。 4双花坤孕胶囊体外抑菌作用的影响，结果表示：双花坤孕胶囊对金黄色葡萄球菌、致病性大肠杆菌、淋球菌、乙型溶血性链球菌、变形杆菌的菌株均有不同程度的抑菌作用。 结论：本研究结果证实双花坤孕胶囊能明显抑制模型中大鼠肉芽肿形成和有效降低大鼠炎性组织中PGE2含量，故能减轻疼痛、炎症。并且能有效抑制细菌生长。表明该药对慢性输卵管炎及其周围炎症的抑制作用明确，具有抑制纤维组织增生、肉芽屏障形成作用，对慢性输卵管炎有积极的治疗作用。本药无毒副作用，是临床安全可靠的治疗方法。