蛋白质磷酸化是生物体内一种非常重要的蛋白质翻译后修饰方式，磷酸化与去磷酸化是可逆的双向调节过程，生物体通过这一过程调控多种生命活动，在哺乳动物生命过程中，非常多的蛋白会发生磷酸化修饰。不正常的磷酸化会使生命活动产生紊乱。　　二氧化钛富集磷酸肽法是近年来广泛应用的一种磷酸肽富集方法，其优点是操作简单、成本低。在上样缓冲液中加入谷氨酸可以抑制非磷酸化肽段的吸附，提高富集的特异性。在实际使用中影响富集效果的因素很多，对这些影响因素要分别进行优化，才能提高富集效率。以6种标准蛋白酶切肽段混合物为研究对象，对二氧化钛富集磷酸肽过程中的乙腈比例、三氟乙酸比例、二氧化钛用量等条件分别进行了优化。结果表明在80％乙腈、1％三氟乙酸、40倍二氧化钛用量(与肽段质量比)条件下，可以取得较好的富集效果。　　将优化后的富集方法应用于腾冲嗜热厌氧菌磷酸化蛋白质的分析，腾冲嗜热厌氧菌是一种从中国云南热泉里分离到的厌氧、糖解、嗜热的细菌。初步鉴定到25个磷酸化蛋白质，为进一步研究这种极端环境下生存的低等生物的生命活动提供了参考信息。　　将优化的富集法应用于C57BL/6J小鼠肝脏蛋白磷酸化蛋白质组研究，重点关注小鼠肝脏细胞核和细胞膜两类具有挑战性的复杂生物样本，首先采用7cm的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳预分离样品，然后将胶切成10个条带做胶内酶切。在研究中，从细胞核蛋白中共鉴定到198个磷酸化蛋白，275个非冗余磷酸化肽段，468个磷酸化位点。细胞膜中共鉴定到175个磷酸化蛋白，298个非冗余磷酸化肽段，338个磷酸化位点。