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目的:通过N3-邻甲苯甲酰基-氟尿嘧啶(N3-o-toluyl-Flulorouracil TFu)与肝门部胆管癌细胞FRH-0201的共同培养观察并与5-Fu比较对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响,探讨TFu的抗胆管癌作用机制,为胆管癌化疗新药研发提供实验依据。 方法:TFu与FRH-0201细胞共同培养,通过Giemsa染色及吖啶橙荧光染色观察药物作用后细胞形态学变化:通过细胞集落形成实验及噻唑蓝(MTT)比色实验检测TFu对FRH-0201细胞增殖动力学影响并与5-Fu比较,通过MTT实验对几种常用的化疗药及方案进行化疗敏感性比较;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡;通过琼脂糖凝胶电泳技术检测凋亡细胞的DNA Ladder。 结果:当TFu浓度高于4mmol/L时显示出明显的细胞毒作用,FRH-0201细胞变圆并在24h内崩解死亡,浓度低于0.016mmol/L时细胞无显著形态学变化,在此浓度之间随TFu浓度升高细胞生长情况渐差,细胞密度减小,细胞伸展逐渐变差,细胞间隙增加,悬浮细胞增多;Giemsa染色及吖啶橙染色可见TFu作用后细胞出现凋亡特征;MTT实验显示在0.016~4mmol/L范围内TFu能明显抑制FRH-0201细胞的增殖,各实验组与对照组比较均P<0.05;该抑制作用有明显的时间依赖性及剂量依赖性;相同作用时间与5-Fu比较,浓度为4mmol/L时两者对FRH-0201细胞抑制率无显著性差异,浓度为0.016~1mmol/L时,TFu抑制率高于5-Fu;相同浓度下与5-Fu比较,当作用时间为72h时有显著性差异,TFu抑制率高于5-Fu;药物敏感性实验可见TFu对FRH-0201细胞增殖抑制作用(55.08%)高于5-Fu(43.86%)及泰素(30.91%),低于阿霉素(79%)及顺铂(69.27%),联合用药时阿霉素、顺铂、TFu联合用药组(79.02%)优于阿霉素、顺铂、5-Fu组(68.51%),达到最高抑制