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苯并(a)芘-7,8-醌(benzo[a]pyrene-7,8-dione, BPQ)是苯并(a)芘(benzo[a]pyrene, B[a]P)的其中一种活性代谢产物。B[a]P一种典型的多环芳烃,它广泛存在于环境污染物如化石燃料的不完全燃烧中。具有极强的致畸致癌致突变性。B[a]P的潜在致癌性是通过各种酶的代谢活化途径实现的。其中一种途径是在醛酮还原酶(aldo-keto reductases, AKRs)的作用下生成BPQ。 BPQ既具有亲电性,又具有氧化还原活性,亲电性使得BPQ能与DNA通过加成反应生成BPQ-DNA加合物。DNA加合物是一类很重要的生物检测指标,是DNA分子化学损伤的一种普遍形式之一,如果生物细胞的自身系统没能识别并修复这类损伤,这种加合物就可能成为致突变、致癌变的最小因子。因此本实验对BPQ-DNA加合物进行了研究,合成了BPQ-dC (Deoxycytidine), BPQ-dA (Deoxyadenosine), BPQ-dG (Deoxyguanosine)的加合物,探讨了三类加合物的分离的最佳色谱条件,对加合物进行了制备,并研究了加合物的光谱性质。BPQ-DNA加合物的合成：(1) BPQ-dC加合物：BPQ (7 mg)和dC (80 mg)于4500μL2：1的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)-磷酸钠缓冲溶液(0.25 M,pH=7.0)中,在65℃下搅拌反应16小时。反应产物经0.45 μm,13 mm的滤膜过滤后,进高效液相色谱分析。(2) BPQ-dA加合物：BPQ (4 mg)和dA (50 mg)于3000μL1：1的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)-磷酸钠缓冲溶液(0.25 M,pH=7.0)中,在60℃下搅拌反应20小时。反应产物经0.45μm,13 mm的滤膜过滤后,进高效液相色谱分析。(3) BPQ-dG加合物：BPQ (4mg)和dG (40mg)于3000μL2：1的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)-磷酸钠缓冲溶液(0.25 M,pH=7.0)中,在60℃下搅拌反应6小时。反应产物经0.45μm,13 mm的滤膜过滤后,进高效液相色谱分析。BPQ-DNA加合物的色谱分离条件：(1) BPQ-dC加合物：色谱柱为YMC-ODS-A反相半制备柱(10×250 mm, 5 pm, Waters);柱温为室温；流动相A为10 mM pH=5.0的HAC-NH4Ac缓冲液,B为3：1的甲醇：乙腈；梯度洗脱：先在1.0 mL/min流速下,65% B和35 %A条件下洗脱5 min,然后在接下来的60 mmin里改变到80% B和20% A;流速为1.0 mL/min;紫外检测器波长是260 nm。使得BPQ-dC加合物得到较好的分离。(2) BPQ-dA加合物：色谱柱为YMC-ODS-A反相半制备柱(10×250 mm, 5 μm, Waters);柱温为室温；流动相A为50 mM pH=7.0的TEAA缓冲液,B为3：1的甲醇：乙腈；梯度洗脱：先在1.0 mL/min流速下,65% B和35% A条件下洗脱5 min,然后在接下来的45 min里改变到100% B；流速为1.0 mL/min;紫外检测器波长是260 nM。使得BPQ-dA加合物得到较好的分离。(3)BPQ-dG加合物：色谱柱为YMC-ODS-A反相半制备柱(10×250 mm, 5μm, Waters);柱温为室温；流动相A为50 mM pH=7.0的TEAA缓冲液,B为3：1的甲醇：乙腈；梯度洗脱：先在1.0 mL/min流速下,60% B和40% A条件下洗脱5 mmin,然后在接下来的40min里改变到90% B和10% A；流速为1.0 mL/min;紫外检测器波长是260 nm。使得BPQ-dG加合物得到较好的分离。BPQ-DNA加合物的制备及光谱性质研究：(1) BPQ-dC加合物：在选定的分离条件下,收集BPQ-dC加合物的各个组分,最终得到4种BPQ-dC的加合物,即：BPQ-dC2、BPQ-dC3-3、BPQ-dC6和BPQ-dC7,质谱测得它们的分子量都是526。其中BPQ-dC2和BPQ-dC3-3有相似的紫外和荧光光谱吸收,BPQ-dC2与BPQ-dC3-3和BPQ-dC6与BPQ-dC7这两对加合物的圆二色谱上下几乎是对称的,并且圆二色谱的形状在250nm以上的部分很相似。(2) BPQ-dA加合物：在选定的分离条件下,收集BPQ-dA 加合物的2个组分,得到BPQ-dA的加合物,即：BPQ-dA1和BPQ-dA2,质谱测得它们的分子量都是550。BPQ-dA1和BPQ-dA2有相似的紫外和荧光光谱吸收,它们的圆二色谱几乎对称,但不完全对称。(3) BPQ-dG加合物：在选定的分离条件下,收集BPQ-dG加合物的4个组分,得到BPQ-dG的加合物,即：BPQ-dG1、BPQ-dG2、BPQ-dG3和BPQ-dG4,质谱测得它们的分子量都是566。其中BPQ-dG1与BPO-dG2和BPQ-dG3与BPO-dG4有相似的紫外和荧光光谱吸收,且它们的圆二色谱上下几乎是对称的。