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研究背景与目的结核病是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,Mtb)引起的慢性传染性疾病,据世界卫生组织调查世界三分之一的人感染结核病,我国结核病的疫情尤为严重。结核病感染虽然非常的严重,但在临床的诊断上还很薄弱,存在严重的冰山想象。目前结核菌素试验(tuberculin skin test, TST)仍是临床上诊断潜在结核感染的唯一可行的手段,但是由于结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative, PPD)是含有200多种蛋白的混合物,所以阳性的结果也不能区分是卡介苗(bacilli calmette guerin, BCG)接种、非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacterium, NTM)还是结核分枝杆菌的感染,有必要建立一种新的诊断方法来取代TST。近年来,随着免疫学和基因组学的发展,出现了以T细胞为基础的体外γ干扰素反应测定法。他的基本原理是,被结核分枝杆菌致敏的T淋巴细胞,再次受到相关抗原刺激后会释放Y干扰素,高水平的γ干扰素反应可以提示结核分枝杆菌的感染。诱导刺激所用的抗原如果选择那些结核分枝杆菌特有而卡介苗和大多数非结核分枝杆菌没有的抗原,比如,早期分泌抗原靶6000(early secreting antigenic target-6, ESAT-6),即可成功地避开上述干扰,使在结核病的诊断中特异性大大提高。方法分四组研究对象：普通结核病人组；儿童、青少年和老年患者组；随疗程进行ESAT-6的动态检测组；艾滋病(human immunodeficiency virus,HIV)阳性合并结核感染组。用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测γ干扰素的含量进行数据的对比分析并建立测定结果的判断标准。结果(1)结核密切接触者与痰培养证实的结核患者与健康对照组相比,ESAT-6反应具有很高的敏感性。结核菌素皮试(TST试验)作为结核病筛查的重要手段,但是在卡介苗(BCG)接种广泛覆盖以及非结核分枝杆菌感染率高的地区,.其特异性受到了严重的干扰。故选取结核分枝杆菌中存在而BCG及大多数非结核分枝杆菌不存在的RD1区编码的蛋白ESAT-6进行体外γ-干扰素诱发来进行结核病的诊断。(2)测定体外全血ESAT-6,在结核病诊断中有较好的敏感性和特异性,尤其是在儿童和青少年结核病诊断中具有更为突出的优势。(3) ESAT-6是结核感染和结核发病早期分泌抗原,65%的病人ESAT-6反应随疗程进展逐渐下降至正常,可以解释其在老年结核患者中敏感性低的原因。(4) ESAT-6体外诱发的γ-干扰素反应在HIV阳性合并结核病的诊断中同样具有很高的价值。ESAT-6反应是否阳性与CD4大于或小于200/mm3无显著性差异,选取这种以增加的比率来作为判断标准具有的优越性.。(5) ESAT-6 IFN-γ反应测定其检出率是PPD皮试的3倍,是PPD IFN-γ反应测定的2倍。结论ESAT-6抗原体外诱发的γ干扰素测定方法在结核潜在感染和结核病诊断中具有较高的优越性。该方法简便,灵敏,特异,对活动性结核病尤其是儿童和青少年结核病的诊断及HIV阳性合并结核感染时均具有较好的诊断价值。该方法值得临床推广。