【摘 要】
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目的:研究榆干离褶伞溶栓酶对血管内皮细胞的保护作用。方法:(1)细胞实验:经H202诱导氧化损伤后,采用MTT法测定L.u溶栓酶对HUVEC存活率的影响;用流式细胞仪检测细胞线粒体跨膜电
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目的:研究榆干离褶伞溶栓酶对血管内皮细胞的保护作用。方法:(1)细胞实验:经H202诱导氧化损伤后,采用MTT法测定L.u溶栓酶对HUVEC存活率的影响;用流式细胞仪检测细胞线粒体跨膜电位与总活性氧含量;Western bolt方法检钡NF-KB-p65、iNOS、eNOS、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3等蛋白的表达;采用硝酸还原酶法检测细胞的NO含量。(2)动物实验:建立血管内皮细胞功能紊乱大鼠模型,检测外周血中循环内皮细胞数,并采用ELISA法测定血浆中AT-Ⅲ活力。结果:(1)细胞实验:MTT结果表明,L.u溶栓酶在一定浓度及时间范围内对H2O2诱导的氧化损伤有保护作用。流式细胞仪检测结果表明,模型组线粒体跨膜电位低于正常组,而总活性氧高于正常组。与模型组比较,用药组线粒体跨膜电位显著升高,并降低了细胞内活性氧。Western bolt结果显示,与正常组比较,模型组明显增加NF-κB-p65蛋白表达,同时增加INOS、eNOS表达,并减少细胞中的NO含量。与模型组相比,用药组可以明显减少NF-κB-p65蛋白表达,同时能减少iNOS、eNOS表达,而且用药组可以降低细胞中NO含量。与正常组比较,模型组明显增加Caspase-8, Caspase-9, Caspase-3蛋白表达。与模型组相比,用药组Caspase-8, Caspase-9, Caspase-3蛋白表达减少。(2)动物实验结果表明,与正常组比较,造模大鼠外周血中循环内皮细胞数增加,并且血浆AT-Ⅲ活力降低。与模型组相比,用药组循环内皮细胞数降低,AT-Ⅲ活力升高。结论:(1)L.u溶栓酶对血管内皮细胞具有保护作用。(2)L.u溶栓酶对NF-κB-iNOS-NO通路具有调控作用,并可能通过该途径对内皮细胞发挥保护作用。(3)L.u溶栓酶抑制氧化损伤造成的HUVEC凋亡。(4)L.u溶栓酶具有促进血管内皮细胞分泌AT-Ⅲ的功能。
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