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肝纤维化是肝脏疾病转变为肝硬化、肝癌的一个极其重要的过程。当肝病发展到纤维化期,即使病因被消除和/或得到了及时治疗,仍基本呈现一种不可逆的病理改变。所以如能在肝纤维化时找到一种较好的治疗方法,无疑对阻止其继续进展和改善预后有非常重要的意义。 近年来,骨髓造血干细胞(HSCs)的可塑性研究取得了巨大进展,HSCs移植后在体内能分化成具有白蛋白分泌功能的肝细胞,为肝细胞移植治疗肝疾病提供了新的供体来源。与成熟肝细胞相比,HSCs具备较高的增殖能力及较低的免疫原性,作为肝细胞移植的供体来源有一定优势,临床应用前景非常突出。通过移植少量细胞来实现受体肝细胞结构和功能的替代,使阻断肝纤维化向肝硬化、肝癌转化成为现实。 HSCs没有明确的形态学特征,都表现为淋巴细胞样的单个核母细胞,CD34+β2m-CD90+表型为HSCs抗原标志被广泛接受,利用免疫磁性分离方法(MACS)可从骨髓细胞中分离出CD34+β2m-CD90+细胞。本试验分离纯化出肝纤维化SD大鼠骨髓CD34+β2m-CD90+细胞在体外用特异性的生长因子进行诱导分化培养,同时将标记的CD34+β2m-CD90+细胞将移植入同种模型大鼠肝内,观察体内外CD34+β2m-CD90+细胞的CD34+β2m-CD90+细胞分化状况及功能表达。以检验骨髓细胞移植的效果,并探讨骨髓CD34+β2m-CD90+细胞治疗肝纤维化的可能机制。 第1章:大鼠骨髓细胞CD34+β2m-CD90+亚群体外培养诱导分化 目的:在体外用HGF+EGF诱导骨髓CD34+β2m-CD90+细胞向成熟肝细胞转化。方法:1.四氯化碳皮下注射建立大鼠肝纤维化模型,磁式细胞分离法取骨髓CD34+β2m-CD90+细胞,流式细胞仪检测;2.DMEM培养细胞,