鲜芦根(冻干)饮片制备及清热泻火、生津止渴药效研究

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目的:制备鲜芦根(冻干)饮片冷冻干燥工艺。对比芦根鲜品、冻干品、晒干品清热泻火、生津止渴的药效特点及差异,为鲜芦根(冻干)饮片炮制规范制定提供支撑。方法:实验1.鲜芦根(冻干)饮片制备及饮片标准研究。采用低温冷冻干燥技术制备鲜芦根冻干饮片。除去杂质,洗净,-50℃预冻,然后将药材放入冷冻干燥机,设定不同条件,制备鲜芦根冻干饮片。按《中国药典》(2020版)检测项目制定其饮片标准。实验2.对干酵母致大鼠发热模型的影响。采用干酵母制备大鼠发热模型,于造模前检测两次肛温,取两次平均值作为大鼠的基础体温。造模后,每1h测量体温1次,于造模后6h分别灌胃给相应药,于给药后1h、2h、3h、4h测体温1次;每组末次测体温后,大鼠眼眶取血,ELISA测血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平;然后处死大鼠,取下丘脑并制备匀浆,检测下丘脑匀浆c AMP、PGE2水平。评价鲜芦根及不同炮制品对大鼠发热模型的药效差异。实验3.对附子干姜肉桂水煎液致小鼠胃热模型的影响。采用附子干姜肉桂水煎液制备小鼠胃热模型,于第1d、5d、10d、1d、19d分别测定肛温两次,取平均值。处死小鼠,解剖取胃,一半制胃匀浆,检测c AMP、SOD及MDA水平;另一半胃,和鼻粘膜、舌,甲醛固定,切片、HE染色,显微镜下观察组织形态的变化。评价鲜芦根及不同炮制品对小鼠胃热模型的药效差异。实验4.对辣椒素致大鼠胃热模型的影响。采用辣椒素制备大鼠胃热模型,鼠活动及外观的变化;至第6周,大鼠眼眶取血,制备血清;处死大鼠,解剖取胃,部分制备匀浆,化学比色法检测血清和胃匀浆中GSH、NO、CAT、SOD活性,ELISA测定血清及胃匀浆中IL-2、IL-6、IL-10、IL-1β、Bcl-2、Bax水平;胃、舌及鼻粘膜HE染色,显微镜下观察病理改变。评价鲜芦根及不同炮制品对大鼠胃热模型的药效差异。实验5.对博来霉素致大鼠肺纤维化模型的影响。采用博来霉素制备大鼠肺纤维化模型,观察各组大鼠表观指标,包括活跃度、精神状态、摄食、呼吸、毛发光泽度和体重等;于最后一次给药2h(禁食不禁水12h),大鼠眼眶取血,检测血清SOD、MDA、TNF-α、TGF-β1、IL-1β、COL-1、COL-3、α-SMA水平;解剖大鼠,取肺,固定、切片、HE染色及Masson染色,光学显微镜下观察大鼠肺组织形态变化。评价鲜芦根及不同炮制品对大鼠肺纤维化模型的药效差异。结果:实验1.采用低温冷冻干燥法制备鲜芦根(冻干)饮片,按中国药典(2020版)检测鲜芦根水分水平(不得过12.0%)、测定浸出物(不得少于12.0%)、总灰分(不得过11.0%)、酸不溶性灰分(不得过8.0%)。实验结果显示鲜芦根冷冻干燥的最佳工艺为-50℃、1.0mbar、24h。实验2.造模6h后,与空白组比,模型组及各给药组给药前大鼠体温显著增高,大鼠出现兴奋躁动、大便秘结、小便色黄、爪趾发红等现象。模型组大鼠血清及下丘脑匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-α、c AMP、PGE2水平显著升高。给药后,鲜芦根高剂量、芦根冻干高剂量大鼠体温下降速度较快,并显著降低大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及下丘脑匀浆c AMP、PGE2水平。芦根晒干高剂量组体温下降较缓,效果次之,芦根晒干低剂量肛温下降最慢,有降低炎症因子的趋势。实验3.与空白组比,模型组小鼠肛温明显上升,表观指征出现显著差异,胃组织中MDA、c AMP显著增高,SOD水平显著降低,胃组织、鼻粘膜、舌组织出现明显病理变化。与模型组比,鲜芦根高剂量组、芦根冻干高剂量组可上调胃组织SOD水平,下调胃组织MDA、c AMP水平,改善胃及鼻粘膜病理较明显,优于芦根晒干高、低剂量组。实验4.与空白组比,模型组大鼠毛色变差、暴躁易怒、精神状态较差,饮食饮水量上升,并伴有便秘和小便短黄,血清中IL-1β、IL-2、IL-6、MPO、BAX、NO水平显著增高,IL-10、CAT、GSH、SOD、GSH-PX、BCL-2水平显著降低,胃组织匀浆IL-1β、IL-6、BAX显著增高,IL-10、EGF、BCL-2水平显著降低;镜检可见大鼠胃粘膜有明显损伤。给药后,鲜芦根高、低剂量组,芦根冻干高、低剂量组胃热表观症状明显缓解,血清中IL-1β、IL-2、MPO、IL-6、NO水平显著下降,IL-10、CAT、GSH、SOD、GSH-PX水平显著上升;胃组织匀浆IL-1β、IL-6、BAX水平显著下降,EGF、IL-10水平显著上升;血清和胃组织匀浆BCL-2水平显著上升;病理检查可见大鼠胃粘膜、鼻粘膜和舌病理结构有明显恢复。芦根晒干高、低剂量组病理胃粘膜及舌病理恢复较缓慢。实验5.与空白组比,模型组大鼠体重明显下降,精神不振、行动迟缓、拱背蜷缩、皮毛枯槁、无光泽,呼吸急促且伴有咳喘;血清SOD下降,MDA增高,肺组织中TGF-β1、IL-1β、TNF-α、COL-1、COL-3、α-SMA蛋白表达量水平显著增加。与模型组比,鲜芦根各给药组和醋酸泼尼松组均可使大鼠肺系数系数明显降低;各给药组可升高血清SOD水平,降低血清MDA水平,降低肺组织中COL-1、COL-3、α-SMA、TGF-β1、TNF-α和IL-1β水平,明显改善大鼠肺足形态。结论:1、鲜芦根(冻干)饮片的最佳工艺为1.0mbar压强下冷冻干燥24h。2、鲜芦根及不同炮制品清热泻火、生津止渴药效作用显著,鲜芦根(冻干)饮片药效与鲜芦根相似,均明显优于晒干品,鲜芦根(冻干)饮片可作为鲜芦根的替代品,临床用于相关疾病的治疗。
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