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背景:晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs）是糖类与蛋白质的氨基酸、脂质、核酸在非酶性条件下经美拉德反应形成的一类不可逆的大分子化合物。AGEs除了可在高血糖及氧化应激等条件下生成,过度高温加热、烘烤的饮食也是体内AGEs的主要来源之一。近年来研究表明,体内高含量的AGEs可通过氧化应激和炎症反应促进肾脏损伤的发生、发展。CYP4A是在小鼠肾组织中高表达的ω-羟化酶。CYP4A可激活PI3K/AKT、MAPK等信号因子促进缺血/再灌注损伤、氧化应激损伤,进而促进多种肾脏疾病的发生、发展。而CYP4A是否可介导AGEs引起的肾损伤及针对CYP4A靶点进行干预是否能够减轻AGEs诱导的肾损伤在国内外尚未见报道。目的:本实验观察特异性抑制CYP4A对AGEs诱导的肾氧化应激损伤的作用,以进一步研究AGEs诱导的肾氧化应激损伤的机制,从而为AGEs诱导的肾损伤的治疗提供新的靶点。方法:1.特异性抑制CYP4A对AGEs诱导的小鼠肾脏氧化应激损伤的保护作用研究将36只C57BL/6J雄性小鼠,体重18-22g,随机分为以下4组:BSA对照组（BSA）;BSA给予HET0016组（BSA+HET0016）;AGEs组（AGEs）;AGEs给予HET0016组（AGEs+HET0016）。采用灌胃的造模方式,分别给予BSA或者AGEs 500μg/kg/d,连续灌胃60天,从第47天开始,腹腔注射CYP4A的特异性抑制剂N-hydroxy-N-（4-butyl-2 methylphenyl）formamidine（HET0016）2.5mg/kg/d或者腹腔注射等量的溶媒对照,连续14天。检测小鼠血清中尿素氮（Urea nitrogen,BUN）、血肌酐（Serum creatinine,CRE）;小鼠肾组织中丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、超氧化物岐化酶（Superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢的含量;采用Western Blot法检测肾组织中RAGE、CYP4A、NOX4、p-JNK/JNK、p-AKT/AKT、胞浆和胞核p65等因子的蛋白表达水平。2.特异性抑制CYP4A对AGEs诱导的小鼠肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用研究2.1应用特异性抑制剂HET0016阻断CYP4A对AGEs诱导的小鼠肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用研究将细胞实验随机分为四组:BSA对照组（BSA（10μM））,HET0016+BSA组（HET0016（8μM）+BSA（10μM））,AGEs组（AGEs（10μM））,HET0016+AGEs组（HET0016（8μM）+AGEs（10μM））。检测肾小球系膜细胞中SOD、GSH的活性;应用倒置荧光显微镜观察ROS水平;采用Western Blot法检测肾小球系膜细胞中RAGE、CYP4A、NOX4、p-JNK/JNK、p-AKT/AKT、胞浆和胞核p65等因子的蛋白表达水平。2.2应用RNA干扰特异性沉默cyp4a对AGEs诱导的小鼠肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用研究将细胞实验随机分为以下四组:BSA+si-control、BSA+si-RNAs、AGEs+si-control、AGEs+si-RNAs。Si-RNAs的干扰序列包括:si-cyp4a10、si-cyp4a12、si-cyp4a14。应用倒置荧光显微镜观察ROS水平;采用Western Blot法检测肾组织中RAGE、CYP4A、NOX4、p-JNK/JNK、p-AKT/AKT、胞浆和胞核p65等因子的蛋白表达水平。结果:1.特异性抑制CYP4A对AGEs诱导的小鼠肾脏氧化应激损伤的保护作用研究与BSA组相比,AGEs模型组血清中BUN、CRE含量明显升高;肾脏组织中SOD活力明显降低;MDA、H2O2明显增高;RAGE、CYP4A、NOX4、p-JNK、核p65等蛋白表达明显上调,胞浆p65、p-AKT蛋白表达明显下调,而AGEs+HET0016组与AGEs模型组相比各项指标均明显改善。2.特异性抑制CYP4A对AGEs诱导的小鼠肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用研究2.1与BSA组相比,AGEs模型组中ROS荧光强度明显升高;LDH含量明显增加;SOD活力明显降低;RAGE、CYP4A、NOX4、p-JNK、核p65等蛋白表达明显上调,胞浆p65、p-AKT蛋白表达明显下调,而予CYP4A的特异性抑制剂HET0016后,上述指标得到了明显改善。2.2与BSA+si-control组相比,AGEs+si-control ROS荧光强度明显升高;RAGE、CYP4A、NOX4、p-JNK、核p65等蛋白表达明显上调,胞浆p65、p-AKT蛋白表达明显下调;与AGEs+si-control组相比,AGEs+si-RNAs组ROS含量下降;RAGE、CYP4A、NOX4、p-JNK、核p65等蛋白表达明显下调,胞浆p65、p-AKT蛋白表达明显上调。结论:特异性抑制CYP4A可通过抑制氧化应激通路对AGEs诱导的肾损伤发挥一定的保护作用。