抗人B细胞系淋巴瘤单克隆抗体的研制

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目的:研制抗人B细胞系淋巴瘤单克隆抗体(McAb)或构建抗人B细胞系淋巴瘤单链抗体库,为淋巴瘤放射免疫治疗奠定基础。方法:采用人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞作为免疫原,免疫BALB/C小鼠:(1)按常规方法融合并经间接ELISA法筛选,制备稳定分泌抗Raji细胞McAb的细胞株,并对McAb的亚型、免疫活性及组织特异性进行鉴定。(2)提取小鼠脾细胞的总RNA,反转录成cDNA,用抗体可变区混合引物扩增全套VH和VL基因,经重叠延伸反应,装配成ScFv基因,克隆至噬菌体载体pHEN-1,构建单链抗体库。结果:(1) 成功地制备了一株抗Raji细胞McAb,命名为SZ-138。琼脂糖双扩散鉴定为IgGl类,ELISA法测定其腹水效价为3.2×10-4。流式细胞仪检测该抗体与Raji和Daudi呈阳性反应;与外周红细胞、白细胞(包括淋巴细胞和中性粒细胞)、未活化血小板、内皮细胞株ECV呈阴性反应。SP免疫组化示该抗体除于胃肠道的腺体和肝脏有交叉反应外,与心、脑、扁桃体、脾、胸腺、甲状腺、前列腺、脂肪组织、动脉血管壁、神经节、平滑肌等组织呈阴性反应。Western blotting分析显示McAbSZ138可特异的识别还原条件下相对分子量约为170KD左右的蛋白多肽。(2)成功地构建了针对B细胞淋巴瘤的单链抗体库。结论:获得一株具有较高免疫活性和组织特异性抗Raji细胞McAbSZ138,并成功地构建了针对B细胞淋巴瘤的单链抗体库,对恶性淋巴瘤的诊断和治疗可能具有一定的临床意义。
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