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目的:胰腺癌(Pancreatic cancer,PC)是一种恶性程度很高的疾病,预后极差,5年生存率不超过5%,被称为“癌中之王”,手术切除联合化疗是胰腺癌目前最重要的治疗方法,但由于患者早期无特异临床表现,仅有约20%的患者可以接受手术治疗,此外,化疗药物副作用大,价格昂贵,因此寻找安全有效的治疗药物迫在眉睫。天然产物种类繁多,结构独特,生物活性多样性,是新药研究的重要来源。天然产物Terphenyllin是一种从珊瑚源真菌念珠菌中分离得到的天然的对三联苯代谢物,有一定的细胞毒性,但是关于其抗肿瘤作用研究较少,本实验拟通过体内外实验探究Terphenyllin对胰腺癌增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,以及对原位胰腺肿瘤生长的影响。方法:1.Terphenyllin对胰腺癌的体外研究1.1通过CCK-8法检测不同浓度Terphenyllin对正常胰腺细胞和多种胰腺癌细胞增殖的影响,选择确定较为敏感的胰腺癌细胞。采用平板克隆形成实验检测不同浓度(0,20,50,200μmol/L)Terphenyllin对两株敏感的胰腺癌细胞生长的抑制作用。1.2采用流式细胞仪检测Terphenyllin对胰腺癌细胞凋亡的影响。1.3采用Western Blot法检测Terphenyllin对凋亡相关蛋白的影响。1.4通过迁移侵袭实验检测Terphenyllin对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。2.Terphenyllin对胰腺癌的体内研究2.1用Terphenyllin治疗Nod-scid胰腺原位癌小鼠,通过活体成像技术观察Terphenyllin对胰腺癌小鼠肿瘤信号强度的影响,同时隔两天量一次体重,并观察小鼠状态。2.2给药结束后,采用活体成像仪观察脏器转移情况,用HE染色,观察Terphenyllin对Nod-scid胰腺原位癌小鼠肿瘤生长情况的影响。结果:1.Terphenyllin对胰腺癌的体外研究1.1CCK8检测结果显示,正常的胰腺细胞与胰腺癌细胞相比,对Terphenyllin的敏感性较低,在胰腺癌细胞中选出比较敏感的Panc1和HPAC细胞作为后续的研究。平板克隆实验表明,随着药物浓度的增加,克隆数明显减少,表明Terphenyllin对Panc1和HPAC细胞的增殖有明显的抑制作用。1.2细胞凋亡结果显示,随着药物浓度的增加,总凋亡率逐渐增加,说明Terphenyllin对Panc1和HPAC细胞有促进凋亡的作用。1.3Western blot结果表明,随着药物浓度的增加,相关的凋亡蛋白PARP,Caspase7,Bcl-2等均有变化。1.4迁移侵袭实验结果表明,Terphenyllin可以抑制胰腺癌细胞Panc1和HPAC的迁移和侵袭。2.Terphenyllin对胰腺癌的体内研究2.1给药期间,活体成像结果显示,给药组肿瘤增长趋势比对照组慢。给药组和对照组体重,精神状态,活动情况无明显差别。2.2处死小鼠后,将小鼠肝,心,脾,肺,肾,脑脏器解剖,单独观察脏器的信号强度,心,脾,肾,脑脏器未发生转移情况,对照组中,6只小鼠中有5只小鼠出现了肝转移,4只小鼠出现了肺转移,实验组中,有2只小鼠出现了肝转移,1只老鼠出现了肺转移。HE染色结果显示肝,心,脾,肺,肾,脑脏器情况与上述活体成像结果一致。结论:本研究分别从体内外验证了天然产物Terphenyllin的机制。在离体实验中,提示Terphenyllin可以有效地抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并可以促进胰腺癌细胞的凋亡。在体实验中,表明Terphenyllin可以有效地抑制Nod-scid小鼠原位癌的生长。天然产物Terphenyllin可能作为一种潜在的治疗胰腺癌的药物,为胰腺癌患者的临床治疗提供思路。