【摘 要】
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作为细胞中的活性大分子,蛋白质是与疾病相关的主要分子,蛋白表达水平的改变与疾病直接相关。因此研究如何对蛋白质进行分离、鉴定,是一项具有重要意义的工作。整体柱具有制
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作为细胞中的活性大分子,蛋白质是与疾病相关的主要分子,蛋白表达水平的改变与疾病直接相关。因此研究如何对蛋白质进行分离、鉴定,是一项具有重要意义的工作。整体柱具有制备方法简单、通透性好等特点,已被较广泛的用作高效液相色谱固定相,用于蛋白质的分离、分析中。本文通过两种聚合方式制备了两种聚卟啉铁整体柱,并分别以其为固定相,通过高效液相色谱法对几种标准蛋白质和几种实际生物样品进行了成功分离。首先,本文通过原位自由基聚合方式,以卟啉铁(Hemin)、甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)作为二元单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)作为交联剂,1,4-丁二醇、丙醇、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为致孔剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,制备得到聚(Hemin-co-GMA-co-EDMA)整体柱。通过扫描电镜、红外光谱法、氮吸附-脱附法和压汞法等方法对得到的整体柱进行了表征。将该整体柱用作高效液相色谱的固定相,在8分钟内对三种标准蛋白进行了成功分离;此外,还分离了鸡卵清以及细胞色素C的酶解液,结果表明卟啉铁的加入增强了该整体柱对蛋白质的选择性,对实际蛋白质样品具有一定的分离能力。其次,为了改善整体柱孔结构的均匀性并提升其对蛋白质的选择性,采用活性-可控的原子转移自由基聚合法(atom transfer radical polymerization,ATRP)制备了聚(Hemin-co-GMA-co-EDMA)整体柱。利用该整体柱对几种标准蛋白进行了成功分离。此外,还分别对人血浆及蜗牛酶进行了分离。结果表明:与原位聚合得到的整体柱相比,通过ATRP方法制备得到的聚(Hemin-co-GMA-co-EDMA)整体柱具有均匀的孔结构和更好的蛋白选择性。
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