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目的:探讨小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）对多药耐药卵巢上皮癌细胞SKOV3/TR30中高表达MDR1基因的抑制作用。通过体外实验了解所用siRNA能否特异性沉默MDR1基因及其作用的时效性。方法:1、运用计算机软件设计MDR1基因PCR引物。在耐药细胞亚系SKOV3/TR30中扩增出MDR1基因相应片段,建立扩增片段与T载体连接质粒,并测序。2、运用脂质体将GAPDH siRNA转染入SKOV3/TR30细胞,以Western-blot法检测干扰后GAPDH蛋白量,从而探索siRNA作用的有效浓度及有效作用时间。3、脂质体法转染设计的MDR1 siRNA,运用荧光定量PCR（fluorescencequantitative PCR）、免疫荧光、Western-blot等方法检测干扰后MDR1基因mRNA的变化,及不同时间点P—gp蛋白表达情况。4、通过MTT法作出运用紫杉醇后细胞生长曲线,计算细胞生长抑制率及紫杉醇IC50,了解干扰前后细胞生物学行为变化。结果:1、运用PCR方法确定紫杉醇耐药细胞亚系SKOV3/TR30具有高表达MDR1特性。通过酶切及DNA测序方法鉴定所构建质粒序列正确。MDR1 PCR扩增片段能用于后续实验。2、通过转染GAPDH siRNA掌握siRNA作用有效浓度及相应作用起效时间。运用所掌握的方法转染MDR1基因siRNA,提取转然后48h细胞总RNA,MDR1PCR结果显示干扰成功。3、荧光定量PCR结果显示干扰后MDR1 mRNA含量明显降低,其MDR1mRNA量占未干扰SKOV3/TR30的0.24%（P＜0.001）,而GAPDH含量无明显变化（P＞0.05）。免疫荧光显示干扰后细胞膜上P—gp明显减少。以上结果说明RNA干扰效果具有有效性及特异性。Western-blot检测显示干扰48h时P-gp量最低,干扰效果最佳,干扰120h时P—gp量恢复到接近无干扰水平。4、MTT法检测加用紫杉醇后细胞生长抑制率及紫杉醇IC50。结果显示干扰前后SKOV3/TR30细胞生长抑制率有明显差异,紫杉醇IC50差异也有显著统计学意义。2noml/L、1250nmol/L浓度紫杉醇对干扰前细胞生长抑制率分别为18.50%,33.68%。干扰后上升为46.46%,56.99%（P＜0.05）。紫杉醇IC50由干扰前3467.73nmol/L下降为344.67nmol/L（P＜0.05）。结论:MDR1 mRNA序列特异性siRNA的引入能高效、特异的减少耐药细胞SKOV3/TR30中相应靶基因mRNA的量,从而降低细胞P—pg的表达,逆转细胞耐药特性。RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术有望成为卵巢癌化疗的有效辅助治疗。