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目的:实验检测hsa-miR-520h与EPHB4在稽留流产绒毛组织及非医学原因选择择期流产妇女绒毛组织中的表达情况,分析hsa-miR-520h与EPHB4在稽留流产中的差异表达,探究并分析hsa-miR-520h及EPHB4与稽留流产的相关性,进一步探索了解hsa-miR-520h及EPHB4对稽留流产的相关影响。探讨两者在稽留流产中的发生发展机制,为预防和治疗稽留流产提供一定的理论基础。方法:1.运用生物信息学方法预测hsa-miR-520h的靶基因,初步探讨hsa-miR-520h的生物学机制。我们选取了Target Scan、miRanda、miRDB、DTANm T、miRWalk五个靶基因预测平台进行预测,并通过两次韦恩图取交集分析得出靶基因。2.应用实时荧光定量PCR技术(Real Time-PCR,RT-PCR),分别检测30例稽留流产妇女(稽留流产组)和30例非医学原因选择择期流产妇女(对照组)绒毛组织中hsa-miR-520h与EPHB4 m RNA的表达情况,并且采用Pearson相关分析法来分析hsa-miR-520h与EPHB4 m RNA的相关性。3.应用蛋白免疫印迹方法(Western Blotting,WB),分别检测30例稽留流产妇女(稽留流产组)和30例非医学原因选择择期流产妇女(对照组)绒毛组织中EPHB4蛋白的表达情况,分析EPHB4在稽留流产中是否存在差异性表达。4.应用免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC),分别检测30例稽留流产妇女(稽留流产组)和30例非医学原因选择择期流产(对照组)绒毛组织中EPHB4蛋白及用CD34特异性标记的绒毛间质微血管密度(microvessal density,MVD)的表达情况,并且采用Pearson相关分析方法分析EPHB4与绒毛间质微血管密度的相关性。结果:1.通过预测软件Target Scan、miRanda、miRDB、DTANm T、miRWalk五个靶基因预测平台进行预测hsa-miR-520h的靶基因,5个软件两次交集的得出hsa-miR-520h的靶基因共有42个,分别TBC1D15 UBE2W MAP3K9 SENP1 CDKN1A ROCK2 ZBTB1 TP53INP1 CBX5 VPS26A TXNIP CCND2 EIF2S1 SS18L1 RIT1 TBL1X NR4A3 GSK3B PKN2 DCBLD2RAB39B RBBP5 KCTD20 EPHB4 SLC31A1 SLC2A3 TMEM123 GOLM1CELSR2 ARL4C INPP5F RUNX1 SEC23IP DMP1 BCL11B PRRG4DENND4C MMP2 LIN54 NMNAT1 EYA1 GRHL2,通过Target Scan数据库靶基因预测平台查询发现hsa-miR-520h与EPHB4存在结合位点。2.本次实验RT-PCR的结果显示:在稽留流产组和对照组的绒毛组织中均有hsa-miR-520h、EPHB4 m RNA表达,在稽留流产组中hsa-miR-520h的表达为(1.10±0.04),对照组中hsa-miR-520h的表达为(0.85±0.11),稽留流产组hsa-miR-520h的相对表达量较对照组显著上调(P<0.01),差异具有统计学意义。稽留流产组中EPHB4 m RNA的表达为(0.30±0.12),对照组中EPHB4 m RNA的表达为(0.70±0.11),稽留流产组EPHB4 m RNA的相对表达量较对照组显著下调(P<0.01),差异具有统计学意义。采用Pearson相关性分析,发现稽留流产组中hsa-miR-520h与EPHB4 m RNA呈负相关(r=-0.677,P<0.01)。对照组中hsa-miR-520h与EPHB4 m RNA呈负相关(r=-0.474,P<0.01)。3.本次实验WB结果显示:稽留流产组与对照组绒毛组织中均有EPHB4蛋白的表达,稽留流产组EPHB4蛋白的表达为(0.48±0.15),对照组中EPHB4蛋白的表达为(1.62±0.28),稽留流产组EPHB4蛋白的表达明显低于对照组(P<0.01),两者之间差异具有统计学意义。4.本次实验IHC结果显示:稽留流产组绒毛组织中绒毛间质微血管密度(1.77±0.34),对照组绒毛组织中绒毛间质微血管密度(8.00±0.04),稽留流产组绒毛间质微血管密度的相对表达量明显低于对照组(P<0.01),两者之间差异具有统计学意义。稽留流产组绒毛组织中EPHB4蛋白表达水平(0.34±0.04),对照组中EPHB4表达水平的表达水平(2.33±0.16),稽留流产组EPHB4蛋白的相对表达量明显低于对照组(P<0.01),差异具有统计学意义。采用Pearson相关性分析,结果发现稽留流产绒毛组织中EPHB4蛋白与绒毛间质微血管密呈正相关(r=0.549,P<0.01)。对照组绒毛组织中EPHB4蛋白与绒毛间质微血管密呈正相关(r=0.846,P<0.01)。结论:1.稽留流产组与对照组绒毛组织中均有hsa-miR-520h与EPHB4m RNA的表达。稽留流产组绒毛组织中hsa-miR-520h的表达明显高于对照组,稽留流产组绒毛组织中EPHB4 m RNA的表达明显低于对照组,hsa-miR-520h与EPHB4 m RNA的表达呈负相关。2.稽留流产组与对照组绒毛组织中均有EPHB4蛋白的表达,稽留流产组绒毛组织中EPHB4蛋白的表达明显低于对照组。3.绒毛组织中EPHB4的表达与血管生成密切相关,EPHB4与绒毛间质微血管密度呈正相关,EPHB4的低表达可能使绒毛血管生成障碍从而导致稽留流产的发生。4.绒毛组织中hsa-miR-520h可能通过抑制EPHB4的合成而导致绒毛血管形成障碍,参与稽留流产的发病过程。