论文部分内容阅读
降低高酮血症的发生率对奶牛场来说极为重要,一方面可以通过适当的围产期奶牛饲喂管理策略,另一方面通过遗传选择策略,培育能够更好地应对生产环境挑战的奶牛。本实验通过日粮中不同水平精料的添加来探究不同精料摄入水平对围产期荷斯坦奶牛高酮血症发生,抗氧化水平及免疫水平的影响;对酮体代谢相关基因多态性与高酮血症进行相关性分析,为防治奶牛围产期高酮血症提供理论依据。试验一:围产前期精料添加水平对奶牛高酮血症发生,抗氧化及免疫指标的影响。旨在探究合理的精料添加水平,为缓解围产期奶牛能量负平衡,减少高酮血症发生,降低氧化应激,提高免疫力提供依据。本研究以27头2～3胎荷斯坦奶牛为研究对象,随机分为三组,低精料组（L）,中精料组（M）,高精料组（H）,在采食相同TMR（每头牛每天TMR中精料添加量为3.0kg）的基础上,分别补饲0 kg,2.0 kg,4.0kg精料补充料,试验期从分娩前20天到分娩当天。测定分娩前7天,分娩当天,分娩后7天血清中高酮血症指标:β-羟丁酸（BHBA）,NEFA,葡萄糖浓度;测定分娩前7天,分娩当天血清中抗氧化指标T-AOC,MDA,SOD,GSH-PX,CAT浓度;测定分娩前7天,分娩当天血清中免疫指标:白蛋白,总蛋白,TNF-α,IL-2,γ-IFN,Ig G,LS及钙磷浓度,比较分析不同精料添加水平对奶牛高酮血症指标,血清抗氧化指标,及血清免疫指标的影响。结果显示低精料组精料添加水平有利于缓解围产期能量负平衡,且BHBA含量保持在较低水平,有助于围产期奶牛抵抗高酮血症的发生。中精料组IL-2,Ig G,TNF-α,LS等免疫指标显著高于其它两组。随着精料添加水平的增高,钙磷含量呈现上升的趋势。低精料组的MDA低于其它两组,CAT,GSH-PX等抗氧化指标含量高于其它两组。综合分析试验结果,对于分娩前三周,低精料组的精料添加水平更有利于荷斯坦奶牛保持健康的状态。试验二:BDH1,HMGCL,PYGL,OXCT1基因多态性分析及其与奶牛高酮血症的相关性分析。旨在寻找与荷斯坦奶牛高酮血症相关的分子标志。以231头荷斯坦奶牛为研究对象,根据高酮血症判断标准（BHBA>1.2mmol/L）和兽医记录,分为正常牛组（NC组,144头）和高酮血症牛组（HC组,87头）。对酮体代谢相关基因BDH1,OXCT1,HMGCL,PYGL四个候选基因外显子（包含部分内含子）采用混池测序法,找出候选基因外显子扩增片段中正常牛组和高酮血症牛组的差异SNPs,利用飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）分型技术对酮体相关基因BDH1,HMGCL,OXCT1,PYGL的SNPs进行基因分型,对候选基因SNPs多态性与高酮血症进行关联分析。对候选基因共检测到17处差异突变位点。BDH1基因1个5,非编码区突变,2个内含子突变;HMGCL基因1个同义突变,1个错义突变,1个内含子区突变,2个3,非编码区突变;OXCT1基因2个同义突变;PYGL基因4个内含子突变,2个同义突变,1个错义突变,其中有1个内含子突变未在数据库中发现其相关记录,其在染色体的位置为chr10:43811976。Rs209922704,rs110936153,rs385624943,rs133034711,rs210326755,rs41255646,rs109697785,rs133433430,rs208833611,rs110613395,rs380959832,rs109741351,new mutation,rs110486343,rs109326649,rs455064012的基因型分布在正常牛组和高酮血症组的无差异,SNP位点rs110881880在正常牛组和高酮血症牛组的基因型分布中差异显著（P<0.05）。rs110881880位点CC,CT基因型更多见于高酮血症牛,提示CC,CT基因型的荷斯坦奶牛更易患高酮血症。由位点rs110613395,rs380959832,rs109741351构建的G-C-G单倍体型是荷斯坦奶牛易感高酮血症的基因型。并发现由位点rs110613395,rs380959832,rs109741351构建的单倍体型G-C-A和由位点rs109741351,new mutation,rs110486343,rs109326649构建的单倍体型A-C-C-T更有利于荷斯坦奶牛抵抗高酮血症。