论文部分内容阅读
目的①探索乙肝病毒能否在bewo细胞中复制,建立对乙肝病毒易感的细胞模型;②探索乙肝病毒能否能使得bewo发生凋亡;③探索TLR3是否在乙肝病毒致bewo细胞凋亡中起作用。方法①bewo细胞与HBV DNA含量为5.0×106 (copies/ml)的血清共培养后,PCR检测细胞中HBV cccDNA的表达情况;②通过流式细胞技术、TUNEL法检测细胞的凋亡情况,探讨能够使得bewo细胞发生凋亡的HBV DNA的剂量、作用时间;③观察PolyI:C刺激对与HBV DNA阳性血清共培养的bewo细胞凋亡的影响,同时流式细胞技术检测TLR3蛋白的改变,推测TLR3在乙肝病毒致bewo细胞凋亡中所起的作用。结果①与HBV DNA阳性血清共培养48小时后,PBS反复洗涤,继续生长24h、48h后bewo细胞中能够检测出HBV cccDNA;②bewo细胞与50μl HBV DNA含量为5.0×106 (copies/ml)的血清共培养8h、24h、48h,早期凋亡率分别为4.34±3.42%、1.98±1.42%、6.58±3.44%,总凋亡率分别为10.78±5.36%、7.21±2.39%、16.35±9.61%,与同期对照组比较差别无统计学意义,P值均大于0.05;③bewo细胞与100μl HBV DNA含量为5.0×106 (copies/ml)血清的共培养8h,早期凋亡率为5.55±1.80%,总凋亡率为10.88±2.33%,与对照组比较差别无统计学意义(P=0.064、P=0.997)。与100μl HBV DNA含量为5.0×106 (copies/ml)血清共培养24h、48h后,bewo细胞早期凋亡率分别为20.76±2.13%、24.23±6.87%,总凋亡率分别为25.58±2.11%、30.95±9.02%,凋亡指数分别为27.17±1.22%、30.47±1.92%,与对照组比较差别均有统计学意义,P值均小于0.001。④Poly I:C刺激后再与HBV DNA阳性血清共培养24h、48h,bewo细胞早期凋亡率分别为6.28±3.70%、6.25±1.35%,总凋亡率分别为7.69±3.71%、6.67±1.54%,均低于HBV DNA阳性血清直接刺激组,t检验差别有统计学意义(P值均小于0.05);⑤PolyI:C刺激组bewo细胞TLR3蛋白平均荧光强度为36.0217±2.71701,对照组细胞为32.5852±1.40918,差别有统计学意义(P=0.02)。结论①乙肝病毒能够在bewo细胞中复制,bewo细胞适合进行体外乙肝病毒感染试验;②乙肝病毒能够使得bewo细胞发生凋亡,上调TLR3的表达,TLR3可能参与了乙肝病毒致bewo细胞凋亡的信号转导;③PolyI:C刺激后上调了TLR3蛋白的表达,降低了与HBV DNA阳性血清共培养的bewo细胞的凋亡率。PolyI:C对TLR3的活化可能增强bewo细胞的抗病毒能力,减少凋亡的发生。