目的:探讨不同光照形式对豚鼠视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）细胞浓度和转化生长因子β2（transforming growth factor-β2,TGF-β2）的影响。方法:选用2周龄幼年健康豚鼠,体外培养RPE细胞,传代、鉴定后,取生长良好的第3⁵代细胞,光照前换用1%胎牛血清培养基。一部分细胞分为维拉帕米（verapamil,Ver）处理组和未处理组,两组进一步分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组,前三组分别接受聚焦光、离焦光（均为将平行光经透镜转化）和平行光照射,空白对照组不接受照射。光照后立即采用激光扫描共焦显微镜（laser scanning confocal microscopy,LSCM）检测细胞内Ca²⁺荧光强度。另一部分细胞同样分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组,在照射后24小时采用免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR技术（real-time fluorescence quantitative PCR, RT-PCR）检测细胞内TGF-β2及TGF-β2mRNA的表达水平。光照在暗室内进行,无自然光干扰,照射前吸掉大部分培养基以避免液体折光所造成的影响;各组光斑直径相同,同一水平面光照度均为300LUX;光源为冷白光,光照期间细胞水平的温度为36.5℃～37.2℃;光照时间为30min。实验结果用SPSS13.0统计软件进行处理,统计学方法采用完全随机设计单因素方差分析和Pearson直线相关分析,分析不同光照形式与效应的关系、Ca²⁺荧光强度与TGF-β2表达的相关关系。结果:1细胞培养及鉴定豚鼠RPE细胞接种后24⁴8h开始贴壁,5⁶d迅速分裂增殖,约7⁹d细胞基本单层融合。传代细胞接种后约4h贴壁,4⁶d达到融合状态。免疫细胞化学法证实所培养的细胞为RPE细胞。2 Ver抑制RPE细胞生长及对RPE细胞内Ca²⁺荧光强度的影响不同浓度的Ver对RPE细胞的抑制具有剂量依赖效应。Ver作用于RPE细胞12h后,20mg/L、40mg/L、80mg/L组的细胞凋亡情况与空白对照组相比均无统计学意义（P>0.05）,120mg/L、160mg/L可显著诱导RPE细胞凋亡,与空白对照组相比有统计学意义（P<0.05）。Ver可降低RPE细胞内Ca²⁺荧光强度,仅80mg/L组与空白对照相比差异有统计学意义（P<0.05）。3不同光照形式对RPE细胞内Ca²⁺荧光强度的影响未经Ver处理的RPE细胞接受光照后,聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组的Ca²⁺荧光强度值分别为1057.21±129.52、705.10±72.86、620.72±80.36、559.23±78.19,聚焦光组较其他各组明显升高,差异有显著统计学意义（P<0.05）,离焦光组、平行光组和空白对照组之间差异没有统计学意义（P>0.05）。加入80mg/L Ver对RPE细胞作用12h后再进行光照,聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组的Ca²⁺荧光强度值分别为353.71±25.45、363.04±66.57、348.04±39.76、305.76±19.66,与空白对照组相比,光照各组的Ca²⁺荧光强度没有明显提高,组间比较没有统计学差异（P>0.05）。4不同光照形式对RPE细胞TGF-β2表达的影响（免疫细胞化学）TGF-β2在各组均为阳性,分布于胞浆和胞核,以胞浆为主。经图像分析,聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组的光密度（optical density,OD）值分别为0.38±0.01、0.36±0.00、0.34±0.03和0.34±0.01,聚焦光组明显高于其他各组,其次为离焦光组,聚焦光组与其他各组、离焦光组与其他各组之间的差异均有统计学意义（P<0.05）。平行光组和空白对照组较接近,TGF-β2的表达变化无明显统计学意义（P>0.05）。5不同光照形式对RPE细胞TGF-β2mRNA表达的影响（RT-PCR）各组均有TGF-β2mRNA表达。聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组RPE细胞TGF-β2mRNA表达的相对定量（relative quantitertive,RQ）值依次是4.58±0.19、2.30±0.16、1.78±0.09和0.92±0.05,组间比较有显著统计学差异（P<0.05）。6 Ca²⁺荧光强度和TGF-β2表达的相关性Ca²⁺荧光强度值与TGF-β2表达的OD值（免疫组化）间、RQ值（RT-PCR）间均有直线趋势,pearson直线相关系数分别为0.808、0.906,相关性有显著统计学意义（P<0.05）。结论:1聚焦光对豚鼠RPE细胞内Ca²⁺荧光强度和TGF-β2的表达均有明显刺激作用,离焦光主要表现为对RPE细胞内TGF-β2的影响。2 Ca²⁺荧光强度的变化与TGF-β2在蛋白表达水平和转录水平上均有相关性,说明Ca²⁺可能参与了TGF-β2表达的信息传递过程。3超过一定浓度的Ver可诱导RPE细胞凋亡,80mg/L可在不引起RPE细胞凋亡的前提下有效降低RPE细胞内Ca²⁺荧光强度。4不同光照形式对Ver阻滞后的RPE细胞内的Ca²⁺荧光强度无明显作用。