血小板细胞最重要的生理功能是参与生理性止血和动脉血栓形成,血小板功能的异常包括活化不足或者活化过度,均会引发严重的出血和血栓性疾病。因此,探究出血或血栓性疾病的机制,阐明血小板活化过程中的分子作用,将会对出血或血栓性疾病的药物研发提供新的靶点分子,也为疾病的治疗带来显著意义。在血小板活化过程中,MAPK作为关键的信号节点分子,对血小板的粘附,分泌,聚集产生重要调节作用。MAPK作为血栓调控的经典信号通路,是由MAP3K激酶,MAP2K激酶,MAPK激酶顺次级联磷酸化组成。但在调控过程中,MAPK网络分子如何具体地对各个不同的血栓形成过程产生影响还不够清楚。Ste20激酶家族作为近年来发现的MAP4K家族成员,其在血栓形成过程中作用和机制尚有待研究。Ste20激酶家族根据结构分为两大类——PAK(p21-activated kinases)和GCK(germinal center kinases)。GCKIV亚家族中的MINK1蛋白已经被我们实验室的前期发表论文证明正向调控止血和血栓形成。TNIK蛋白也属于GCKIV亚家族,它在1999年才被首次发现。虽然近年的研究已明确TNIK在细胞增殖、神经发育等过程中扮演重要作用,但并未在血栓形成领域中进行研究。鉴于TNIK和MINK1的蛋白家族同源性以及MAPK家族蛋白在血小板和血栓中的重要作用,我们作出假设:TNIK通过调控MAPK介导血小板活化,参与血栓形成过程。本研究利用基因敲除小鼠模型,首次研究了 TNIK在血小板功能以及血栓形成中的作用。实验结果概括总结如下:(1)在三氯化铁诱发的肠系膜动脉血栓模型中,TNIK血小板特异性敲除小鼠的动脉堵塞时间显著延长,几乎是野生型小鼠的两倍。(2)在血小板活化功能实验中发现,低浓度的凝血酶和胶原刺激后,TNIK敲除血小板的聚集水平显著下降,但TNIK不影响α颗粒的释放。另外,TNIK敲除血小板在纤维蛋白原上的铺展面积下降。(3)TNIK敲除导致高低浓度各种刺激剂导致的血小板致密颗粒释放显著降低。而在用ADP水解酶Apyrase作用下,TNIK敲除血小板和野生型血小板聚集水平和在纤维蛋白原上的铺展面积的差异均消失。此外,外源性非聚集浓度的低剂量ADP加入,可使TNIK敲除血小板在纤维蛋白原上的铺展面积恢复到野生型水平。(4)在分子机制方面,TNIK敲除使p38、AKTThr308/Ser473位点磷酸化水平降低。综上所述,TNIK可能是正向调控血小板活化和血栓形成的新信号分子,在血小板中的可能作用为影响致密颗粒的释放,其分子信号转导可能通过p38和AKT的活化进行。