【摘 要】
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该文系统研究了不同缩合剂对固相化学合成胸腺素α的影响,并对其合成工艺和分离纯化工艺进行优化.最佳的合成工艺为:以HBTU为缩合剂,以2-4当量的试剂(前11个氨基酸为2当量,后续的为4当量),平均11h/氨基酸的缩合速度化学合成胸腺素α;缩合后和脱保护后的洗涤次数均以6次为宜.该条件下合成的胸腺素α的粗品收率为89.9％,纯度为31.2％,目标物胸腺素α的收率为28.0％,单位成本为2.49 RM
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该文系统研究了不同缩合剂对固相化学合成胸腺素α<,1>的影响,并对其合成工艺和分离纯化工艺进行优化.最佳的合成工艺为:以HBTU为缩合剂,以2-4当量的试剂(前11个氨基酸为2当量,后续的为4当量),平均11h/氨基酸的缩合速度化学合成胸腺素α<,1>;缩合后和脱保护后的洗涤次数均以6次为宜.该条件下合成的胸腺素α<,1>的粗品收率为89.9％,纯度为31.2％,目标物胸腺素α<,1>的收率为28.0％,单位成本为2.49 RMB/mg胸腺素α<,1>.分离纯化工艺为:首先以离子交换层析法对胸腺素α<,1>粗品进行初步的分离纯化,以除去粗品中大量的杂质.采用DEAE Sepharose Fast Flow填料,pH5.8的0.02mol/L磷酸钠缓冲液以及pH5.8的0.5mol/L氯化钠和0.02mol/L磷酸钠缓冲液,上样量为50mg.经层析后产品的纯度提高到75％,收率为60％.然后以反相高效液相层析法对胸腺素α<,1>进行最终的纯化.采用C18柱,以0.1％TTA为离子对试剂,乙腈线性梯度洗脱,上样量为50mg.反相层析后产品的纯度达到95％,收率为60％.两步纯化的总收率为36％,纯度符合要求,纯化规模达到半制备水平,为胸腺素α<,1>的工业化奠定了基础.此外,还首次K.C.Chou等筛选的抗SARS八肽进行了探索和研究,着重考察了不同的缩合剂和缩合时间对化学合成抗SARS八肽的影响,建立八肽的合成工艺和分离纯化工艺.其最佳的合成工艺为:以HBTU为缩合剂,以2当量的试剂,平均5h/氨基酸的缩合速度化学合成八肽.该条件下合成的八肽的粗品收率为87.6％,纯度为72.8％,目标物八肽的收率为63.8％,单位成本为1.23RMB/mg八肽.其分离纯化工艺为:以制备型RP-HPLC对八肽进行分离纯化,采用C18柱,以0.1％TFA为离子对试剂,乙腈线性梯度洗脱,上样量为10mg.反相层析后产品的纯度达到95％,符合对纯度的要求,收率为65％.活性测定结果表明八肽对SARS病毒有很强的抑制作用,具有开发为治疗SARS的多肽药物的前景.
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