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文献综述部分:文献综述一:查阅近年来关于中药单体(方)及复方治疗银屑病的实验研究方面的文献,从中药单体(方)及复方对银屑病的实验动物模型、血液流变学及微循环、角质形成细胞(KC)、成纤维细胞(FB)、细胞因子、神经肽六个方面的影响进行分类、归纳和总结。以求对中医药治疗银屑病的实验研究有一个总体的认识。文献综述二:查阅近年来关于地黄、紫草、牡丹皮及其主要活性成分的研究性文献,对三者的来源、功效、化学成分(主要是梓醇、紫草素、丹皮酚)及药理研究概况作了综述。它们的药理活性都非常广泛,在银屑病治疗中也有很好的开发前景。实验研究部分:目的:研究生地、紫草、牡丹皮的主要单体成分梓醇、左旋紫草素、丹皮酚对KGF诱导的HaCaT细胞过度增殖的影响,探讨生地、紫草、牡丹皮治疗银屑病的有效成分和可能的作用机制。方法:1、选取HaCaT细胞株体外培养。2、CCK-8法检测不同浓度的梓醇、左旋紫草素、丹皮酚对KGF诱导的HaCaT细胞过度增殖和细胞生长曲线的影响。3、倒置显微镜下观察药物干预后HaCaT细胞形态学变化。4、流式细胞仪检测不同浓度的梓醇、左旋紫草素、丹皮酚对KGF诱导的HaCaT细胞过度增殖的细胞周期的影响。结果:1、CCK-8法的实验结果显示,KGF可明显促进HaCaT细胞增殖(P<0.05),其促增殖作用呈浓度依赖性,最佳浓度为10ng/ml。浓度高于或等于10-6mol/L的梓醇可促进KGF诱导的HaCaT细胞过度增殖效应(P<0.05),促增殖率呈浓度和时间依赖性,最佳浓度为10-4mol/L,随着作用时间延长,促增殖率反而降低;浓度高于或等于10-6mol/L的左旋紫草素和浓度高于或等于31.25 mg/L的丹皮酚均可抑制KGF诱导的HaCaT细胞过度增殖效应(P<0.05),生长抑制率呈浓度和时间依赖性,浓度越大,抑制性越强,随着作用时间延长,生长抑制率反而降低。2、细胞生长曲线显示:10ng/ml KGF作用下,HaCaT细胞生长加快,自培养1天后起各对应时间点细胞数均较无药对照组增加(P<0.01),细胞培养5天后,KGF组和无药对照组细胞生长速度又有接近的趋势。浓度高于或等于10-6mol/L的梓醇可促进KGF诱导的HaCaT细胞的生长加快,自培养1天后起,各对应时间点细胞数均较KGF对照组增加(P<0.05);浓度高于或等于10-6mol/L的左旋紫草素和浓度高于或等于31.25 mg/L的丹皮酚均可抑制KGF诱导的HaCaT细胞的生长加快,自培养1天后起,各对应时间点细胞数均较KGF对照组减少(P<0.05)。3、倒置显微镜下HaCaT细胞形态学显示:KGF孔的细胞密度较无药对照孔的有所增加。梓醇干预孔的细胞密度较KGF对照孔更密集,左旋紫草素和丹皮酚干预孔的细胞密度较KGF对照孔的有所减少。细胞形态在各孔间无明显差异。4、细胞周期结果表明10ng/ml的KGF作用24小时后,进入S期的HaCaT细胞比率较无药对照组增加(P<0.01),同时,G0G1,期比率降低(P<0.01),G2M期比率升高(P<0.01)。浓度高于或等于10-6mol/L的梓醇可促进KGF诱导的HaCaT细胞的S期比率增加(P<0.05)、G0G1,期比率降低(P<0.01),促进作用呈浓度依赖性,最佳浓度是10-6mol/L;G2M期比率与KGF对照组无明显差异(P>0.05)。浓度高于或等于10-6mol/L的左旋紫草素和浓度高于或等于31.25 mg/L的丹皮酚均可抑制KGF诱导的HaCaT细胞的S期比率增加(P<0.01),浓度高于或等于10-mol/L的左旋紫草素和浓度高于或等于15.625 mg/L的丹皮酚均可抑制KGF诱导的HaCaT细胞的G0G1期比率降低(P<0.01),G2M期比率升高(P<0.01),抑制作用呈浓度依赖性,浓度越大,抑制作用越强。各组均未见凋亡峰。结论:1、KGF通过促进细胞进入S期和G2M期来诱导HaCaT细胞的过度增殖,可在体外模拟银屑病表皮KC过度增殖状态,KGF诱导的HaCaT细胞过度增殖模型是银屑病体外研究较理想的模型。2、左旋紫草素和丹皮酚通过阻滞HaCaT细胞向S期和G2M期转化,使细胞生长增殖停滞在G0G1,期来抑制KGF诱导的HaCaT细胞过度增殖效应,这是紫草和牡丹皮治疗银屑病的可能机制,其有效成分是左旋紫草素和丹皮酚。梓醇促进细胞进入S期,从而促进KGF诱导的HaCaT细胞过度增殖效应,不能通过抑制KC的增殖来治疗银屑病,生地治疗银屑病的有效成分和作用机制有待从其他角度进一步探讨。