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目的：克隆内蒙古白绒山羊VEGF基因,构建毛囊特异性表达载体PCDsRed2-KV,稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF的转基因的细胞克隆。检测VEGF基因在皮肤细胞中的表达。此外本研究尝试发现新的剪接变体。检测VEGF 138是否存在于内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞中,检测内蒙古白绒山羊脑、心脏、肝、脾、肾、肺6种组织中VEGF 164、VEGF138和VEGF 120三种剪接变体的mRNA丰度。方法：采用RT-PCR技术克隆内蒙古白绒山羊VEGF基因cDNA,并进行生物信息学分析。以pCDsRed2载体为基本骨架将VEGF 164基因cDNA序列亚克隆到KAP6-1启动子下游,接续连接红色荧光蛋白表达元件DsRed,构建VEGF 164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。pCDsRed2-KV载体转染内蒙古白绒山羊皮肤成纤维细胞,RT-PCR检测VEGF mRNA表达量,Western blot检测VEGF蛋白的表达。利用Taqman探针荧光实时定量方法确认新发现的剪接变体VEGF138存在于内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞中。采用SYBR Green荧光实时定量检测VEGF164、VEGF138和VEGF 120三种剪接变体在内蒙古白绒山羊6中组织中的mRNA丰度。结果：克隆到内蒙古白绒山羊VEDF基因的三个剪接变体VEGF164、VEGF138和VEGF120的cDNA序列,其中VEGF138是首次发现。VEGF164 cDNA序列573bp,包含了全长ORF,编码190个氨基酸,N端的26个碱基为信号肽序列；VEGF138 cDNA序列495bp,包含了全长ORF,编码164个氨基酸,N端的26个碱基为信号肽序列；VEGF120 cDNA序列441bp,包含了全长ORF,编码146个氨基酸,N端的26个碱基为信号肽序列。VEGF164、VEGF138和VEGF120三种剪接变体在内蒙古白绒山羊脑、心脏、肝、脾、肾、肺组织中均有表达,但VEGF138的mRNA丰度远小于VEGF165和VEGF120。测序结果显示表达载体pCDsRed2-KV中,VEGF164基因正确连接在毛囊特异性启动子KAP6-1下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。筛选得到转基因细胞克隆,PCR检测显示外源KAP6-1启动子和VEGF164基因整合到细胞基因组中。转染VEGF基因的内蒙古白绒山羊皮肤细胞中,VEGF mRNA表达量和蛋白表达量均有明显增加。结论：成功构建稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164的真核表达载体,稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,并为进一步通过转基因克隆技术获得毛囊特异性超表达VEGF164基因绒山羊新品系提供了条件。VEGF基因在内蒙古白绒山皮肤细胞中表达为转基因绒山羊新品系建立提供了理论基础。VEGF基因在内蒙古白绒山羊至少有3个剪接变体,分别是VEGF164、VEGF138和VEGF120,其中VEGF138是首次发现。三种剪接变体在内蒙古白绒山羊脑、心脏、肝、脾、肾、肺组织中均有表达,VEGF138的mRNA丰度远小于VEGF165和VEGF120,为进一步研究VEGF不同剪接变体的功能奠定了基础。