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本研究以sPDGFR-Fc为模式蛋白,结合新型一次性旋转振荡式tubespin(?)细胞培养管和基因瞬时转染技术的优势,探讨在哺乳动物细胞中快速低成本制备抗体及抗体类蛋白候选药物的技术体系和可行性。先用50mLtubespin(?)细胞培养管采用旋转振荡培养的技术来培养CHO DG44细胞,对细胞的培养条件进行初步研究,跟踪细胞的生长状态,绘制生长曲线,用质粒pEGFP-N1为模式质粒,以直链PEI (25KD)为转染试剂转染DG44细胞,优化瞬时转染条件,成功建立了50mL一次性tubespin(?)细胞培养管悬浮振荡培养CHO DG44细胞的技术体系,细胞的密度最高可达3.5×106／mL,摸索并优化了与实验室条件相适应的瞬时转染CHO DG44细胞的方法、条件,最佳的瞬时转染DNA:PEI比例为1：4,1：5,在这个条件下转染pEGFP-N1效率可达41.51±3.28%。通过建立的细胞培养和转染技术探索重组蛋白的瞬时表达。以4种载体构建PDGFR基因的表达载体：pCDNA3.1-PDGFR-FC, pIRESneo3-EGFP-PDGFR-FC, pIRESneo3-KH2-PDGFR-FC, pIRESneo3-KH PDGFR-FC,将构建的4种质粒瞬时转染DG44细胞,选出表达最优质粒,进行后续的研究,western-blotting检测宿主细胞中的目的蛋白,ELISA方法检测细胞培养液中的蛋白表达量,结果发现,重组蛋白sPDGFRα-Fc可以分泌到培养基中,以二聚体的形式存在,并且被糖基化,蛋白的表达量最高可达16.68mg／L,这为下一步的药物开发奠定了基础。此外还对质粒转染DG44细胞的机制进行了初步研究。通过马尔文粒径仪检测聚阳离子包裹质粒后的粒径大小,并观测离子浓度对复合物稳定性的影响,结果发现盐离子对DNA-PEI复合物的形成和稳定起着关键作用,没有盐离子的情况下,复合物形成的微粒会很不稳定。长时间将DNA-PEI复合物放置在盐离子溶液中,对复合物的聚集起着促进作用,DNA-PEI复合物放置8h后,粒径一直在增大,最高可达到4206nm。DNA-PEI复合物在基础培养基中,培养基成分可以使复合物在30min内保持相对稳定,粒径的直径大小一直保持在800nm左右。