论文部分内容阅读
【研究目的】探讨CTGF和KL-6在整个矽肺病的进程中的改变规律和其在这个进程中所起的效用,为矽肺病的初期诊治判断及效果评价给予一定的理论上的支撑。【研究方法】1.实验动物的研究SPF干净级的Wistar的雄性的大鼠84只,将其任意平均分配成两个组为染尘实验组及生理盐水对照组。运用非气管暴露法向气管内注入SiO2悬浮液来给大鼠进行染尘,以此建立矽肺模型。按照不同的时间点分为7、14、21、28、60、90d这六个组,每组取7只处死,取其肺部组织来做HE染色及免疫组化分析,观摩其病理学上的改变以及CTGF和KL-6在肺部组织之中的表达位置及数量多少的情况,将一部分的肺组织做成一定量的匀浆并用酶联免疫吸附法测得Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量来确定建模是否成功;同时收集支气管肺泡灌洗液（BALF）及血清,采用（ELISA）测量CTGF及KL-6的含量;运用原子吸收光谱法测得各个时相的染矽尘大鼠的血清中硅元素的浓度。2.现场流行病学研究选取山东某金矿研究对象共180人,其中矽肺Ⅰ、Ⅱ期患者、接尘但无矽肺临床表现的工人各40名分别为矽肺Ⅰ、Ⅱ期组、接尘组,及矽肺Ⅲ期患者21名为矽肺Ⅲ期组,另选39名与其他各组在各方面均衡可比的地面后勤人员作为对照组。研究对象所离心的血清中CTGF和KL-6的质量浓度用ELISA测量;计算每个分组的工人的累计粉尘接触量（CTE）来探讨各个期别中CTE与CTGF和KL-6含量之间的相关性关系。3.粉尘内接触剂量的分析运用原子吸收光谱法测量染矽尘大鼠各时间点血清及肺组织匀浆中硅元素的含量,并做相关性分析;测量不同期别矽肺患者血清中硅元素的浓度,分析各期别内硅元素与CTGF、KL-6的相关性。【研究结果】1.肺纤维化相关因子CTGF、KL-6在矽肺发生发展过程中作用的实验研究1.1染矽尘的大鼠的BALF和血清之中CTGF、KL-6质量浓度的改变BALF和血清中的CTGF质量浓度在各个时间点相比较生理盐水对照组而言,均有不同程度上的升高迹象,且呈现出一种先增后降态势,在统计学水平上的差别是有意义的（P<0.05）。BALF和血清中KL-6在各时间点相比较生理盐水对照组均有不同程度的上升,随时间延长呈不断增加趋势,在统计学水平上的差别是有意义的（P<0.05）。1.2染矽尘大鼠肺组织病理性质的改变状况对照组的肺组织用肉眼可以观察到肺脏的质地比较柔软,颜色正常并且红润,富有弹性,HE染色光镜之下观测到肺部组织及肺泡的内部结构是完整的没有被破坏,并伴随着一些炎性症状的反应;7天的时候肺泡与肺泡之间的距离变长,间距增宽,这时候就会看到数量庞多的巨噬细胞、中性粒细胞在各个肺泡的腔内大量的聚集在一起并浸入腔内;28天的时候肺泡腔大部分基本消失,支气管内壁增厚,炎性细胞主要为淋巴细胞和浆细胞,偶见成纤维细胞;90天的时候肺泡腔结构模糊不清,形态变异,成纤维细胞大量出现,呈现出明显的纤维化。1.3染矽尘大鼠肺组织免疫组化染色结果矽肺大鼠肺组织中CTGF阳性信号区域是在细胞质上,与对照组相比,CTGF蛋白在各实验组的表达均增高,且在统计学水平上的差别是有意义的（F=4.006,P<0.05）,随着时间的延长,呈先增后降趋势,14d、21d和28d在统计学水平上的差别是有意义的（P<0.05）。KL-6主要由Ⅱ型肺泡上皮细胞（增殖、再生或受损）分泌,染色结果表明:与对照组相比,KL-6蛋白实验组的表达均增高（F=3.175,P<0.05）,28d、60d和90d差异均有统计学意义（P<0.05）。随着时间的延长,蛋白的表达的量呈现不断的增多上升态势。2.肺纤维化相关因子CTGF、KL-6在矽肺发生发展过程中现场流行病学研究2.1不同期别矽肺患者血清中CTGF、KL-6含量变化与对照组比,呈先增后减的趋势,Ⅱ期矽肺患者血清中CTGF的浓度达到高峰,但均高于对照组,与对照组比,Ⅱ期、矽肺患者差异较明显,且均有统计学意义（P<0.05）,与接尘工人比,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期矽肺患者差异明显且都无统计学意义（P>0.05）;与对照组比,不同期别患者血清中KL-6浓度的差异有统计学意义（F=11.839,P<0.05）,大体随着期别变化呈上升趋势,矽肺Ⅱ期、Ⅲ期的差异有统计学意义（P<0.05）;与接尘组相比,矽肺Ⅱ期、Ⅲ期的差异有统计学意义（P<0.05）。2.2累积粉尘接触量（CTE）与肺纤维化相关因子CTGF、KL-6的相关性分析对照组、接尘组、矽肺Ⅰ期组、矽肺Ⅱ期组和矽肺Ⅲ组分别依据累积接尘量（CTE）进行分层,把CTE与血清中的CTGF和KL-6含量进行相关性分析,发现其与这两个因子皆无相关性（P>0.05）。3.粉尘内接触剂量（血清硅含量）的分析在染矽尘大鼠血硅质量浓度在染矽尘时间变得越来越久而呈现下降态势,并且都要高于生理盐水对照组（P<0.05）;人群血清中硅元素含量在病例组也呈现一种下降趋势,且均高于对照组和接尘组（P<0.05）;染矽尘大鼠血清中硅元素与CTGF和KL-6的含量进行相关性分析,发现与CTGF浓度存在正相关关系（r=0.507,P<0.05）,与KL-6存在一种负相关关系（r=-0.313,P<0.05）,且血清与肺组织匀浆中硅元素含量之间存在正相关关系（r=0.696,P<0.05）;人群流行病学调查中将各组人群按血硅浓度的不同进行分层,然后与血清中CTGF和KL-6浓度进行相关性分析,结果发现在矽肺Ⅱ期组内血清硅元素的含量与二者浓度之间存在相关关系（rCTGF=-0.428,PCTGF<0.05;rKL-6=-0.550,PKL-6<0.05）,接尘组和其他病例组不存在这样的相关（P>0.05）。【研究结论】1.染矽尘大鼠BALF、血清及肺组织中CTGF和KL-6的变化趋势基本一致,与肺组织病理变化及免疫组化染色结果一致,说明CTGF、KL-6在矽肺病整个进程之中扮演着重要的角色。2.不同期别矽肺患者血清中CTGF、KL-6浓度改变是一种在能够很好的指标,且CTGF、KL-6含量与累计接尘量不存在相关性,说明可能是累积粉尘接触量作为外暴露存在浓度不稳定,个体差异导致实际吸入量不均匀等。3.硅元素在染尘大鼠及不同期别患者血清中的含量变化提示其作为矽尘内暴露的可能性,血硅浓度与血清中CTGF、KL-6含量的相关性提示他们之间可能存在剂量反应关系,为进一步将血硅浓度作为矽肺早期诊断的生物标志物提供理论基础。