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目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)CT849蛋白在宿主细胞炎症调节过程中起到的作用及有关机制,为进一步了解Ct致病情况提供可靠的、准确的数据支持。方法:CT849蛋白的表达与鉴定,从STD基因数据库查获ct849全基因序列进行优化密码子合成获取ct849基因序列,构建p GEX-4T-1/ct849重组载体,测序鉴定;将重组载体p GEX-4T-1/ct849转化至E.coli BL21(DE3)内诱导表达,采用纯化、去内毒素及BCA法检测CT849蛋白浓度;用多粘菌素B去除CT849蛋白内毒素后,先用PMA预处理THP-1细胞24h,再用浓度为0μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml的CT849蛋白分别刺激预处理的THP-1细胞24h,采用ELISA检测随CT849蛋白浓度的增加,TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8促炎细胞因子表达水平的变化;选择浓度为10μg/ml的CT849蛋白在0h、6h、12h、24h和36h刺激THP-1细胞,采用ELISA检测随时间不同CT849蛋白对THP-1细胞产生TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8促炎细胞因子表达水平的变化;用ERK抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB202190分别预处理THP-1细胞,浓度为30μmol/L处理2h,后用10μg/ml CT849蛋白刺激THP-1细胞24h,采用ELISA、western blot检测CT849蛋白ENK、JNK、p38磷酸化水平。之后,纯度能够达到90%;2.浓度为0μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml的CT849蛋白刺激被PMA巨噬化预处理的THP-1细胞24h,随着CT849浓度的增加,TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的含量也出现一定程度地升高。3.10μg/ml的CT849处理的细胞,促炎细胞因子IL-1β、IL-6和IL-8表达水平在24h达到高峰,在12h TNF-α达到高峰。4.利用CT849蛋白对细胞进行处理,处理之后发现ERK和JNK磷酸化水平出现了比较明显地上升,而p38磷酸化水平几乎没有变化。5.JNK和ERK阻断剂对CT849蛋白诱导TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8产生起到阻碍作用。结果:1.双酶切及测序鉴定重组体p GEX-4T-1/ct849,目的基因ct849基因序列与密码子优化后的基因序列符合率达到100%;重组体在E.coli BL21(DE3)中可表达目的蛋白(44.3k Da),进行纯化处理结果:1.双酶切及测序鉴定重组体p GEX-4T-1/ct849,目的基因ct849基因序列与密码子优化后的基因序列符合率达到100%;重组体在E.coli BL21(DE3)中可表达目的蛋白(44.3k Da),进行纯化处理之后,纯度能够达到90%;2.浓度为0μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml的CT849蛋白刺激被PMA巨噬化预处理的THP-1细胞24h,随着CT849浓度的增加,TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的含量也出现一定程度地升高。3.10μg/ml的CT849处理的细胞,促炎细胞因子IL-1β、IL-6和IL-8表达水平在24h达到高峰,在12h TNF-α达到高峰。4.利用CT849蛋白对细胞进行处理,处理之后发现ERK和JNK磷酸化水平出现了比较明显地上升,而p38磷酸化水平几乎没有变化。5.JNK和ERK阻断剂对CT849蛋白诱导TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8产生起到阻碍作用。结论:CT849蛋白通过激活ERK/JNK信号通路诱导THP-1细胞分泌促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8。