时间分辨荧光免疫分析是20世纪80年代以来发展起来的一项新的免疫分析技术,使用具有荧光寿命长(可消除来自样品的短寿命的荧光和光学器件的散射光的影响)、Stokes位移大、特征峰非常尖锐等特点的稀土配合物作为标记物,通过延迟测量时间的方法,有效地消除背景荧光的干扰。因此时间分辨荧光免疫分析法具有比其它免疫分析方法更高的灵敏度。时间分辨荧光免疫分析法中重要的是双功能螯合剂的合成,所谓的双功能其一要实现与稀土离子配位,其二,在不影响荧光性能条件下能实现与生物分子以共价键相连。类三吡啶多羧酸衍生物是目前固相时间分辨荧光免疫分析的新型双功能螯合剂。其中杂环母体、蛋白质连接基团和稀土离子螯合配位基团的合成是实现双功能的关键所在。本研究从直接固相时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂合成需要出发,参考有关文献,设计、合成和表征了N,N,N’,N’-[2,6-二(3’-氨甲基-1’-吡唑基)-4-溴吡啶]四(乙酸乙酯)及几种重要的中间体。实验以2,6-二溴吡啶为起始原料,经过氧化、硝化、还原、亲核取代、重氮化-桑德迈耶(Sandmeyer)反应、自由基溴化等反应进行合成,利用差热分析、红外光谱、1H核磁、气相-质谱、元素分析等测试手段对各步产物进行了表征以证明产物结构和合成方法的可靠性。此外,对部分中间体的合成条件、反应机理也进行了研究。本实验中合成的化合物N,N,N’,N’-[2,6-二(3’-氨甲基-1’-吡唑基)-4-溴吡啶]四(乙酸乙酯)分子中所有氮原子和羧基上的氧原子可通过穴状螯合物结构实现与镧系金属的配位;环上4-溴则可通过取代反应引入其他基团实现与蛋白质的连接。其他中间体2,6-二(3’-甲基-1’-吡唑基)-4-溴吡啶、2,6-二(3’-溴甲基-1’-吡唑基)-4-溴吡啶等的合成不仅为化合物自身的合成提供了方法,更对其他穴状类三吡啶螯合剂的合成具有启发和借鉴意义。