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天花粉蛋白（TCS）是一种从葫芦科植物栝楼块根分离纯化的碱性蛋白，属单链核糖体失活蛋白。能作用于核糖体大亚基28S rRNA 4324位腺苷酸特定位点，具有RNA N-糖苷酶活性。1998年TCS注射剂作为计划生育类用药被国家基本药物品种目录收录（NO.676），可直接用于临床。TCS具有多种药理学特性，包括妇科引产、免疫调节、抗人类免疫缺陷病毒及抗肿瘤活性。TCS对以下肿瘤作用显著：腹水型网织细胞肉瘤、癌肉瘤、宫颈癌、绒癌、肝癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤等。肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，手术切除仍是目前最有效的治疗措施，但远期疗效仍有待进一步提高。根据我所资料，肝癌根治性切除后5年复发率为61.5％，即使小肝癌也达43.5％。因此，针对术后复发转移的干预是提高疗效的关键。目前多采用经血管内化疗栓塞和免疫结合中医治疗，预防以及治疗复发病例。涉及到的有效药物少、选择余地小。长期应用某种药物,不仅毒副作用大，而且肿瘤极易对其产生耐药性。针对无法手术患者的治疗手段则更少。因此寻找新的抗肿瘤增殖和抗转移复发药物是对肝癌手术治疗的积极补充。我们从TCS抑瘤作用入手，探索其干预肝癌转移和增殖的可能性；研究与生物调节剂联用改善不良反应和增加疗效的可行性，为进一步临床试验积累经验。第一部分 TCS干预肝癌增殖与转移的研究一、TCS对不同肝细胞株的细胞毒应用正常人肝细胞株L-02，高、低转移潜能人肝癌细胞株（MHCC97H及MHCC97L），MTT比色法检测不同浓度梯度TCS 72h细胞毒。结果TCS在2.5～160μg/ml范围内明显抑制MHCC97H和MHCC97L增殖，最大抑制率达80％。TCS对不同肝细胞株的细胞毒有差别：对快速增殖的MHCC97H和MHCC97L细胞抑制明显；L-02相对不敏感。L-02、MHCC97H和MHCC97L的细胞毒IC50分别为21.1、6.9、5.0μg/ml,差别有统计学意义（P<0.05）。结果显示肝癌细胞对TCS较敏感，对正常肝细胞有较高安全性。在TCS抑瘤有效作用浓度范围内，其对正常肝细胞抑制率低。TCS对MHCC97H细胞 6、12、24h细胞毒实验显示：TCS对MHCC97H短程细胞毒作用接近，与72h相比呈低水平，最大抑制率仅26.2％。提示TCS需要经过一段时间才能入胞并结合到核糖体上发挥抗增殖作用。二、TCS对荷瘤裸鼠LCI-D20肿瘤增殖的影响 采用本所建立的原位移植裸鼠人肝癌转移模型LCI－D20，共接种42只裸鼠：第1组7只（TCS 0.4mg/kg，qd）、第2组7只（TCS 0.2mg/kg，qd）、第3组7只（TCS 0.4mg/kg，qod）、第4组7只（TCS 0.4mg/kg，q3d）、生理盐水对照组14只。接种次日TCS腹腔给药，连续用药35日处死。测肝肾功能、血常规、瘤重及移植瘤径。结果TCS对荷瘤裸鼠抑瘤作用明显，呈剂量依赖性。1～4组瘤重分别为827.5±118.3mg、1267.1±552.3mg、<WP=6>1352.8±231.5mg、1939.1±153.2mg；抑瘤率分别为62.8％、48.7％、48.5％、23.5％。1～3组与对照组相比差别有显著统计学意义（P<0.01）。随给药量的增加，抑制作用逐渐增强，但高剂量组相应肝损程度重。当总药量相同、给药间隔不同时，抑制作用相近；连续用药组肝损重。提示我们可以在不影响抑瘤效果的前提下，通过间隔给药方式起到减少不良反应的效果。TCS对荷瘤裸鼠肾功能无明显影响，与对照组相比差别无统计学意义。对肝脏蛋白合成有抑制作用，1～3组白蛋白水平与对照组相比差别有显著统计学意义（P<0.01）。伴有肝细胞损伤，与对照组相比谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）升高较明显，呈剂量依赖性。第4组与对照组相比，差别无统计学意义。TCS对荷瘤裸鼠血液系统无明显影响。最大剂量组（第1组），未出现红细胞、白细胞和血小板明显减少，与对照组相比差别无统计学意义。考虑到我国肝癌患者多合并中度以上的肝硬化，如何减少不良反应是必须考虑的问题。最简单的办法是寻找抑制作用与不良反应的平衡点，对LCI－D20而言，中等剂量、间隔给药是较好的平衡点。从长远看，可从三方面入手：⑴单抗偶联获得免疫毒素，达到增效、减少用量的目的；⑵生物改造TCS分子构型；⑶与其他药物联用。前两个方面受技术限制，还无法实际应用。因此目前能直接用于临床的途径只有探索与其他制剂联用。干扰素（IFN）与抗增殖化疗药作用机理不同；其作为生物调节剂，对多种化疗药有生化调节作用。我们就联合应用TCS与IFN，以期改善TCS不良反应、增加疗效进行了可行性研究。三、IFN对TCS抑瘤、抗转移作用的影响 采用L-02、MHCC97H、MHCC97L细胞株MTT比色法检测IFN（1×104 IU/ml、1×105IU/ml、1×106IU/ml）对TCS（7个稀释度：2.5μg/ml 、5μg/ml、10μg/ml 、20μg/ml、40μg/ml 、80μg/ml、160μg/ml）72h细胞毒的影响。结果对MHCC97H及MHCC97L，均未见两药的协同抑瘤作用。应用LCI－D20模型，共接种56只裸鼠：TCS组12只（0.4mg/kg，qod）、IFN组12只（5×105IU/kg，qd）、TCS＋IFN组12只、生理盐水对照组20只。用药35d，结果表明：TCS组抑瘤率49.2％；IFN组69.2％；联用组达92.2％。单纯主要效应分析显示：单用TCS抑瘤作用明显，与对照组相比差别有显著统计学意义（P<0.01）。单用IFN亦获明显抑瘤作用（P<0.01）。析因?