九种健脾胃中草药对三种典型益生菌体外生长及溃疡性结肠炎大鼠的影响

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中草药为我国独特的资源,种类丰富,取材方便,价格低廉,使用方便,易于推广使用。随着对抗生素危害认识的不断深入,中草药杀灭细菌的同时激发动物有机体抗感染的免疫力以及毒副作用小等优点逐渐被人们接受并受到青睐。中医认为:“泄泻之本,无不在于脾胃”。溃疡性结肠炎作为典型的炎症性肠病,难以根治复发率高,临床主要表现有腹泻、腹痛、粘液血便等,中医将其发病原因归为先天禀赋不足,后天脾胃功能不健。随着微生态学的研究进展,表明该病与肠道微生态环境密切相关,同时脾胃之病也与肠道微生态环境及小肠密切相关。因此有必要对健脾胃中草药对肠道益生菌的影响进行研究。而双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌作为典型的肠道益生菌,不仅能够耐受动物消化道环境,能够在人体肠道内定植调节肠道菌群,并且还具有预防和治疗腹泻、排除毒素、提高机体免疫力等功能特性;但是其对营养要求十分苛刻,且只有摄入剂量在1×106CFU/mL或以上时,才能充分发挥益生功能。本研究以九种常见的健脾胃中草药为原材料,以长双歧杆菌、动物双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌为试验菌株,筛选出适合益生菌体外生长的中草药,进一步以TNBS型溃疡性结肠炎大鼠为模型,给予增菌较好的中草药提取液,观察溃疡性结肠炎大鼠的恢复情况及肠道中菌群的变化。本文先以比浊法研究神曲,薏米,红参,甘草,山药,砂仁,白术,茯苓,木香九种健脾胃中草药对双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌体外生长的影响,筛选出三种对益生菌体外增菌效果较好的中草药,分别为神曲、薏米、红参,与基础培养基差异极显著(p<0.01),进而以Hungate活菌计数法对该三种中药以6.25%、12.5%、25%、50%四个浓度的中药培养基进行活菌计数验证,结果表明,三种中草药对益生菌均表现出一定的促生长的作用,而浓度为25%的神曲培养基均对益生菌体外生长有最显著的增菌效果,与基础培养基差异差异极显著(p<0.01)。进一步确定该三种中草药对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌三种致病菌体外生长的影响,结果表明,红参对于三种致病菌体外生长均具有抑制作用,而神曲和薏米则表现为一定的促进作用。这仅是体外试验的结果,而体内试验要考虑到肠道中菌群之间相互作用以及肠道pH等生理环境的影响,所以下一步要进行体内试验观察神曲、薏米、红参对于益生菌生长的影响。体内试验以溃疡性结肠炎大鼠为试验模型,分为对照组和神曲组、红参组、薏米组三个试验组,每组8只,以TNBS/乙醇法进行造模成功后,试验组每天按照4g/kg剂量定时灌胃给予放置室温的各中药提取液,模型对照组给予等剂量的蒸馏水,每天一次,试验共14天。每日观察记录大鼠的体重下降情况、大便性状和大便隐血、便血情况,进行DAI评分,处死前无菌采集粪便,试验期结束后处死大鼠,对结肠进行病理切片观察,测定结肠中丙二醛和髓过氧化物酶的含量,采用定量PCR方法分析UC大鼠肠道菌群分布情况。结果表明,试验后期对照组大鼠DAI评分逐渐低于试验组,但各组间差异性不显著。对照组大鼠与试验组相比,表现出脾脏肿大,胸腺萎缩,肠重指数增大。病理观察发现对照组较试验组来说,黏膜层和黏膜下层有大量炎性细胞且大量充血水肿,淋巴细胞浸润灶且肌层细胞变形。试验组大鼠结肠中丙二醛和髓过氧化物酶的含量有所降低。通过荧光定量PCR分析大鼠肠道菌群,结果神曲可以使UC大鼠肠道中双歧杆菌、乳杆菌和大肠杆菌的含量增加;红参可以使UC大鼠肠道中乳杆菌含量增加,大肠杆菌含量明显降低;薏米可以使UC大鼠肠道中乳杆菌和大肠杆菌的含量增加。对于该三种中草药对益生菌和大肠杆菌生长的影响,体内结果与体外结果大致相同。初步确定红参具有益生元的功能,神曲、薏米具有益生因子的功能。确定了神曲、红参、薏米的益生功能以后,对基础培养基进行优化筛选出适合益生菌生长的复合增菌培养基。将浓度为25%的神曲培养基作为基础,与另外增菌效果较好的红参、薏米进行复配,通过正交试验优化筛选出增菌效果最佳的中药复合培养基,动物双歧杆菌增菌培养基最佳配比为神曲25%、薏米5%、红参10%,37℃培养16h时活菌数达2.26×1011CFU/mL,较对照基础培养基和cMRS培养基分别提高了提高了525、52倍;长双歧杆菌增菌培养基最佳配比为神曲25%、薏米5%、红参5%,37℃培养16h,活菌数达到最大值1.64×1011CFU/mL,较对照基础培养基和cMRS培养基分别提高了提高了886、20倍;鼠李糖乳杆菌增菌培养基最佳配比为神曲25%、薏米5%、红参10%,37℃培养13h时活菌数达3.52×1011CFU/mL,较对照基础培养基和cMRS培养基分别提高了提高了550、43倍。本试验为健脾胃中草药和益生菌之间的关系进行了系统的研究,为以后开发新的中草药保健品以及益生菌相关产品提供了理论依据。
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