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2,3-丁二醇(BD)是一种重要的化工原料和潜在的替代能源,更是一种重要的生物基产品。可用来制备聚合物、油墨、香水、熏蒸剂、增湿剂、软化剂、增塑剂等,也可以作为药物的手性载体。本文对粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)发酵生产2,3-丁二醇进行了研究。
首先,通过摇瓶实验,确定了粘质沙雷氏菌生长及2,3-丁二醇生产的最佳培养条件及最优发酵培养基。最佳培养条件为:初始pH值为7.0,过程pH值控制为6.0,温度为30℃。并在此基础通过单因子、正交实验与Box-Behnken中心组合设计响应面分析法得到了优化发酵培养基(g/L)(蔗糖90;蛋白胨20;酵母粉5;柠檬酸10;MnSO40.07;KH2PO40.5;FeSO40.02;MgSO40.5)。采用优化后的培养条件与培养基,2,3-丁二醇的产量由15.9g/L增加到45.27g/L,提高了近3倍。
其次,在发酵罐实验中,通过分批补料发酵比较几种不同的补料及调控策略:间歇发酵、菌体浓度反馈-指数流加,建立了一种新的流加调控策略,即菌体浓度反馈-RQ组合调控策略,提高了细胞量(16.59gDCW/L),有效避免了发酵过程中溶氧难以控制的问题,从而获得高产量2,3-丁二醇,产物浓度达到115.5g/L,产率达到2.88g/L·h。
最后,通过对代谢途径中的一些中间产物进行实验分析,发现在培养基中添加柠檬酸可以促进菌体生长,提高糖利用速率,缩短发酵周期,2,3-丁二醇产量及产率分别比对照提高了1.43、3.23倍。乙酸不仅是代谢产物,还是提高2,3-丁二醇产量的重要培养基添加成分。在培养基中添加10g/L乙酸盐,虽然在发酵初期对菌体生长有一定的抑制作用,但发酵结束所得到的细胞量、2,3-丁二醇产量及产率分别比对照提高了1.43、1.84、1.74倍。后考察发现在培养基中添加10g/L柠檬酸,培养9h后补加10g/L乙酸盐对2,3-丁二醇发酵的有利影响明显优于单独添加或同时添加。