酸腐病是除青绿霉病之外危害柑橘类果实重要的采后病害之一,目前国内外已有的研究报道中关于其致病机理的研究甚少。本研究通过农杆菌介导真菌遗传转化方式,建立酸腐病菌遗传转化体系,从分子水平上研究其致病机理。主要以实验室前期分离得到的柑橘酸腐病菌菌株(AY-1)为实验受体菌株,通过农杆菌介导法,将含有新霉素磷酸转移酶基因(neo)的T-DNA片段插入到受体菌基因组中。通过对影响转化效率的各个条件的初步优化,主要包括受体菌孢子浓度、共培养时间、共培养温度、承载膜等,构建了柑橘酸腐病原菌遗传转化体系。经过抗生素G418筛选和PCR鉴定,外源基因被成功插入到受体菌基因组中。主要的研究结果如下:(1)为了建立病原菌遗传转化体系,构建了含neo基因的载体质粒pTFCM-G418。(2)AY-1对抗生素G418的敏感性检测结果表明,当G418的浓度达到300μg/mL时能完全抑制住AY-1的生长,为了提高得到阳性转化子的概率,确定1000μg/mL G418为最终筛选浓度。(3)通过对影响转化效率的各个条件的初步探索,目前获得的最优转化条件是:受体菌AY-1孢子浓度为4×106(CFU/m L),根癌农杆菌AGL-1 OD600为0.4左右,预培养中不添加AS诱导,25℃下在玻璃纸上培养48h。在此等条件下,转化效率最高可得到60个突变子(每106个孢子)。(4)在含有1000μg/mL G418的PDA上生长的待定转化子,经PCR鉴定均能扩增出目的基因,再连续继5代培养之后仍具有抗性,表明获得的突变菌株基因组中含有目的基因,并且外源基因能随其基因组稳定遗传。