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目的探讨靶向构建的携带人蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)基因和活化转录因子4 (activiting transcription factor 4, ATF4)基因的小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)重组腺病毒对软骨细胞凋亡的影响。方法应用AdEasyTM腺病毒载体系统,构建并包装重组腺病毒siPERK和siATF4。感染细胞后,通过RT-PCR和蛋白质印迹法检测软骨细胞ATDC5中PERK和ATF4 mRNA和蛋白的表达。应用衣霉素(Tunicamycin, TM)建立内质网应激(Endoplasmic reticulum stress, ERS)模型,观察当ATF4被沉默时,ATDC5细胞的增殖和凋亡情况,以及感染重组腺病毒siPERK时,SW1353细胞的增殖和凋亡情况；微团培养ATDC5和C3H10T1/2细胞,应用骨形态发生蛋白2 (Bone morphogenetic protein 2, BMP2)诱导细胞分化,分别在第1,3,5天时感染Ad-RFP、siPERK和siATF4重组腺病毒,采用FCM、TUNEL、免疫印迹和免疫组化等检测软骨细胞分化过程中的凋亡情况。结果成功构建并获得重组腺病毒siPERK和siATF4。重组腺病毒处理细胞48h后,ATDC5细胞中PERK和ATF4的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。在ERS状态下,siATF4感染后,与对照组相比较,ATDC5细胞的凋亡率明显降低(P<0.05),增殖明显增加(P<0.05)；siPERK重组腺病毒感染细胞后,SW1353细胞增殖增加(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05)；在BMP2诱导细胞分化过程中,FCM结果显示,siPERK和siATF4重组腺病毒联合感染组细胞凋亡率逐渐升高,且高于对照组(P<0.05)。免疫印迹和免疫组化实验结果与FCM结果一致。结论在ERS状态时,沉默ATF4可以促进软骨细胞增殖并抑制其凋亡；抑制PERK基因可以促进内质网应激状态下软骨肉瘤细胞的增殖,并抑制其凋亡；而在软骨细胞分化过程中,同时沉默PERK和ATF4可促进软骨细胞的凋亡。