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目的：
为了建立周脂素（perilipin，Plin）转基因小鼠，进一步研究周脂素的生物学功能，阐明其在多种病理生理中的作用机制。本研究利用基因工程的方法对周脂素基因进行克隆，构建pMDTM18-T/ap2-promoter/Plin 载体，获得显微注射用周脂素脂肪组织特异表达基因片段，为进一步建立过量表达周脂素的转基因小鼠模型奠定基础。
方法：
通过长聚合酶链式反应（long distance polymerae chain reaction,Long PCR），从基因组DNA中，扩增出脂肪酸连接蛋白（fatty acid binding protein, ap2）基因转录起始位点上游6.1kb的基因序列（包含有5.4kb ap2启动子序列），克隆至pMDTM18-T Vector，构建重组载体pMDTM18-T/ ap2-promoter，Kpn I和Spe I酶切下5.4kb启动子序列，进行测序鉴定。通过改进提取脂肪组织RNA的方法，从C57BL/6J附睾脂肪组织提取高质量的总RNA，用逆转录PCR(Reverse Transcription-PCR,RT-PCR)扩增出周脂素cDNA编码区基因，克隆入pMDTM18-T Vector中，构建重组载体pMDTM18-T/Plin，通过Spe I、Not I限制性内切酶酶切后，对其进行测序验证，并与GeneBank比对。以Kpn I和Spe I双酶切重组载体pMDTM18-T/ap2-promoter切下5.4kb ap2启动子，再以Kpn I和Spe I双酶切重组载体pMDTM18-T/Plin，将ap2启动子克隆到pMDTM18-T/Plin上游，得到转基因载体pMDTM18-T/ap2-promoter/Plin，用限制性内切酶Kpn I，Not I酶切，并进行测序鉴定。双酶切重组质粒pMDTM18-T/ap2-promoter/Plin，得到显微注射用周脂素脂肪组织特异表达基因片段，回收纯化后进行浓度测定可用于显微注射。
结果：
获得的重组载体pMDTM18-T/ap2-promoter、pMDTM18-T/Plin、及转基因载体pMDTM18-T/ap2-promoter/Plin，酶切后经DNA电泳鉴定及DNA测序，与GeneBank当中的序列一致。获得的显微注射用周脂素脂肪组织特异表达基因片段，经浓度纯度测定达到了下一步显微注射的要求。
结论：
成功构建了脂肪组织特异表达转基因载体pMDTM18-T/ap2-promoter/Plin，获得了显微注射用周脂素脂肪组织特异表达基因片段，从而为进一步建立过量表达周脂素的转基因小鼠模型奠定了基础。