若尔盖高原沼泽土和草甸风沙土细菌遗传多样性和系统发育研究

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从若尔盖高原采集了11个沼泽土和草甸风沙土样,采用稀释平板法测定了细菌数量特征,进而分离纯化得到了66株细菌,其中,分离自沼泽土壤35株,草甸风沙土31株,对其形态特征进行了显微观察。在此基础上,采有BOX-PCR,16S-23S rDNA和16S rDNA PCR-RFLP技术研究了供试菌株的遗传特性,进而选取22个代表菌株测定16S rDNA全序列对其系统发育进行了研究。结果如下:1.沼泽土壤的细菌数量高于草甸风沙土,其中,以5号沼泽土数量最大,为22.56×105cfu·g-1;11号草甸风沙土数量最少,仅为0.73×105 cfu·g-1。细菌垂直分布明显,沼泽土和草甸风沙土细菌数量均随着土层加深,数量呈现下降的趋势。2.从分离菌株的培养特征看,分离供试菌株在培养基上生长的速度有明显不同,培养时间为24h至4-5d,但形成的落形态特征没有明显差异。菌落多为圆形,浅黄色或乳白色,半透明,表面光滑,湿润,边缘整齐。对66株菌显微观察显示,菌株多为杆菌,G+占总数的63.64%;个别菌株为球菌。3.采用BOX-PCR和16S rDNA PCR-RFLP,IGS PCR-RFLP对分离的66株细菌遗传多样性分析。BOXAIR-PCR分析中,在76%相似性水平上,66个菌株被分为10个遗传群;16S rDNA PCR-RFLP分析中,在78%相似性水平处,除REG14,REG20,REG22和REG55和单独成群外,其余菌株分为8个遗传群;在73%的相似性水平处,IGS PCR-RFLP将供试菌株分成了9个遗传群。在78%相似性水平处,除REG14,REG20,REG22和REG55和单独成群外,其余菌株分为7个群。4.对22个代表菌株进行16S rDNA全序列分析并构建了系统发育树,结果表明,这些菌株分布于10个不同的系统发育分支。其中,以芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)和分枝杆菌属(Mycobacterium)为主,其余菌株分布于Lysinibacillus属、中华根瘤菌属(Sinorhizobium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、固氮菌属(Azotobacter)、红球菌属(Rhodococcus)、微球菌属(Micrococcus)和醋酸杆菌属(Acetobacter)等7个属。
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