菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒基因在寄主小菜蛾幼虫体内转录模式的研究

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多分DNA病毒(PDV)是与膜翅目姬蜂科和茧蜂科寄生蜂共存的一类独特病毒。它在寄生蜂成功寄生过程中起着不可替代的作用,是寄生蜂克服寄主免疫、适应寄主内部营养条件并使之满足其自生发育需要的重要因子。本文首先用PCR方法验证了75个菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(CvBV)待选基因中的64个基因,然后以此为基础,用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得17个基因的cDNA全长,并且用qRT-PCR的方法对其中38个基因在寄主不同组织中的转录模式进行了初步研究。现将研究结果总结如下:1.将CvBV基因组序列与寄生后小菜蛾幼虫转录组EST序列进行交叉比对后,得到75个待选基因片段,它们大小在300bp到1940bp之间。经分析发现这些基因来自于CvBV的7个基因家族,它们分别是:蛋白酪氨酸去磷酸化酶基因(Protein tyrosine phosphatase, PTP)(30个)、BEN(7个)、锚蛋白(Ankyrin,6个)、凝集素(Lectin,2个)、P94-like(2个)、CrV1-like(1个)和组蛋白(Histone,1个)。其余基因除小部分在其他茧蜂多分DNA病毒中有同源序列,在此命名为Conserved hypothetical protein(Con,9个)外,大部分为无同源序列的新基因,在此命名为Hypothetical protein (Hyp,17个)。2.通过反转录PCR (RT-PCR)的方法对75个待选基因片段进行验证,其中64个EST片段为阳性片段,他们分别是:PTP(27个)、BEN(6个)、Lectin(2个)、P94-like(2个)、Ankyrin(1个)、CrV1-like(1个)、Con(9个)和Hyp(16个)。3.采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了17个CvBV基因的全长cDNA,依据它们在CvBV基因组不同片段上的位置,依次命名为c3-3、c4-6、c6-2、c6-5、c6-6、c7-7、 c9-1、c12-4、c12-6、c12-9、c14-1、c15-2、c24-8、c28-1、c28-5、c29-7和c30-1,它们分别编码107、252、304、320、304、238、259、300、297、287、323、340、252、277、312、526和82个氨基酸的蛋白,其中仅c3-3、c7-7和c15-2含有信号肽序列。通过对9个获得cDNA全长的PTP进行了基于氨基酸序列的生物信息学分析,发现其中7个为具有催化活性的PTP。4.明确了CvBV侵染寄主后,本研究所涉及的38个CvBV基因均主要在寄生后小菜蛾幼虫的血细胞中转录,它们的转录模式可以分为三种情况:转录水平随寄生后时间的增加而(1)先升后降;(2)持续升高和(3)持续下降,其中c3-3、c6-6、c6-7、c12-9、c13-1、c14-1、c16-1、c18-1、c22-1、c24-8、c27-2和c28-6的转录模式为先升后降,c4-1、c4-3、c4-6、c6-2、c9-1、c12-6、c17-1、c27-1和c28-1的转录模式为持续升高,而c5-3、c7-7、c10-1、c12-3、c15-2、c21-3、c23-1、c23-3、c23-4、c26-2、c26-4、c29-6和c34-1的转录模式为持续下降。
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